產(chǎn)DNJ細(xì)菌菌株的篩選、鑒定及發(fā)酵工藝優(yōu)化.pdf

1、1-脫氧野尻霉素（DNJ）是一種哌啶生物堿，具有抑制葡萄糖苷酶，從而抑制糖吸收、降低餐后血糖、抗腫瘤轉(zhuǎn)移、抗病毒等作用。目前，DNJ的來源多是桑樹提取物，但其產(chǎn)量不高，而化學(xué)合成方法工藝復(fù)雜?；诖藛栴}，本研究篩選出一株產(chǎn)DNJ的細(xì)菌菌株，對其進(jìn)行了鑒定，優(yōu)化了該菌株產(chǎn)DNJ的發(fā)酵條件和培養(yǎng)基，利用脫脂蠶蛹粉制備蠶蛹蛋白胨來替代市售蛋白胨用于發(fā)酵罐擴(kuò)大發(fā)酵。
　　利用瓊脂平板法和反相高效液相色譜法從桑園土壤中篩選產(chǎn)DNJ菌株，28

2、1個(gè)菌株中篩選出一株產(chǎn)DNJ的細(xì)菌菌株，其產(chǎn)量約為80.22mg/L，并命名其為WB-1。
　　對篩選出的細(xì)菌菌株WB-1進(jìn)行了生理生化和分子生物學(xué)鑒定。菌落呈米白色，菌落表面濕潤、光滑，邊緣整齊，微隆起。菌株屬于好氧菌，無運(yùn)動(dòng)性，能水解利用淀粉，能利用檸檬酸鹽作為單一碳源，能分解過氧化氫，不產(chǎn)H2S，明膠液化、苯丙氨酸脫氨酶以及甲基紅試驗(yàn)都呈陰性。利用PCR法擴(kuò)增了16srDNA片段，序列測定后檢索NCBI數(shù)據(jù)庫，序列與球形賴氨

3、酸芽孢桿菌（Lysinibacillussphaericus）親緣關(guān)系最近，因此確定我們分離的菌株WB-1為賴氨酸芽孢桿菌。對該菌株的生長曲線進(jìn)行了測定，得出其各個(gè)生長階段分別為：0~4h處于遲滯期，4~14h處于對數(shù)期，14~22h處于穩(wěn)定期，22h以后進(jìn)入衰亡期。
　　利用單因素實(shí)驗(yàn)確定了搖瓶發(fā)酵的條件及其培養(yǎng)基組成的基本成分。搖瓶發(fā)酵條件為：發(fā)酵溫度為30℃，發(fā)酵初始pH為6.5，搖床轉(zhuǎn)速為180rpm，裝液量為30mL，發(fā)

4、酵時(shí)間2d。通過PB試驗(yàn)、Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)依次對菌株WB-1發(fā)酵產(chǎn)DNJ的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進(jìn)行了多因素優(yōu)化，得到優(yōu)化后的條件為：葡萄糖0.5%、蔗糖0.3%、牛肉膏0.5%、蛋白胨0.795%、MgSO40.255%、NaCl0.05%，裝液量38mL，在此條件下進(jìn)行發(fā)酵可得DNJ產(chǎn)量為184.95mg/L，所得的DNJ產(chǎn)量較優(yōu)化前的基礎(chǔ)性培養(yǎng)基提高了1.31倍。
　　酶解脫脂蠶蛹粉制備蠶蛹蛋白胨，將其與市售蛋白胨復(fù)