瘦素及其受體在糖尿病慢性皮膚潰瘍組織中表達(dá)及臨床意義的研究.pdf

1、【背景】 自發(fā)性潰瘍及創(chuàng)面形成后難愈合是臨床上常見的糖尿病(DM)慢性并發(fā)癥，發(fā)生在下肢的慢性潰瘍還可導(dǎo)致截肢，給患者造成巨大的精神壓力、嚴(yán)重影響生活質(zhì)量，同時(shí)也造成沉重的社會(huì)經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。據(jù)統(tǒng)計(jì)，糖尿病患者的下肢皮肽潰瘍發(fā)生率約100倍于非糖尿病患者，其下肢截肢的危險(xiǎn)性為非糖尿病人的15倍。隨著近年來糖尿病發(fā)病率的迅速上升，這一并發(fā)癥已呈現(xiàn)明顯增多趨勢(shì)。深入研究糖尿病慢性皮膚潰瘍形成機(jī)制，尋找新的預(yù)防和治療方法已是當(dāng)今的一項(xiàng)重要課題。

2、 與皮膚組織緊密相連的脂肪組織作為一個(gè)重要的內(nèi)分泌器官，其產(chǎn)生的多種脂肪因子都參與了糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)生，如：脂聯(lián)素、抵抗素、瘦素(Leptin)、腫瘤壞死因子α(TNFα)、白細(xì)胞介素6(IL-6)和PPAR-γ調(diào)節(jié)的血管生成因子PGAR等。創(chuàng)傷修復(fù)領(lǐng)域的研究發(fā)現(xiàn)：這些脂肪因子在發(fā)育學(xué)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、干細(xì)胞作用、組織修復(fù)等多方面還與皮膚組織存在著密切聯(lián)系。胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGF-β)、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子

3、(VEGF)等脂肪細(xì)胞分泌的生長(zhǎng)因子均是參與創(chuàng)面愈合、介導(dǎo)炎性反應(yīng)和肉芽組織形成的重要生長(zhǎng)因子。此外，脂肪細(xì)胞分泌的纖溶酶原激活物的抑制劑、血管緊張素、性激素類、與脂質(zhì)蛋白代謝相關(guān)的脂蛋白脂酶、游離脂肪酸以及視黃醛結(jié)合蛋白質(zhì)等，均在不同層面和/或以不同方式與組織修復(fù)發(fā)生關(guān)聯(lián)。瘦素(Leptinl是由OB基因編碼、脂肪組織分泌的一種多肽類激素。最初發(fā)現(xiàn)它具有食欲控制和能量消耗的作用，通過對(duì)糖、脂代謝的各個(gè)層次的調(diào)控作用而與糖尿病存在著復(fù)雜

4、的聯(lián)系。近年來研究發(fā)現(xiàn)它還具有調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)、活化巨噬細(xì)胞、促進(jìn)血管生成、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)、膠原合成、加速再上皮化等生理功能，而這些功能均與創(chuàng)面愈合進(jìn)程有著密切的聯(lián)系。Goren等對(duì)3例糖尿病慢性足部潰瘍患者的皮膚組織進(jìn)行了檢測(cè)，未發(fā)現(xiàn)任何Leptin受體的表達(dá)，推測(cè)“皮膚組織對(duì)Leptin的抵抗或不敏感"導(dǎo)致的Leptin作用缺陷可能是潰瘍愈合延遲的主要原因之一。這一發(fā)現(xiàn)為研究糖尿病慢性皮膚潰瘍發(fā)生機(jī)制的拓展了新的思路。 Lept

5、in的作用障礙是否是糖尿病慢性皮膚潰瘍獨(dú)有的致病因素?其與受體在糖尿病慢性皮膚潰瘍中的表達(dá)與非糖尿病原因?qū)е碌穆云つw潰瘍和正常皮膚組織中的表達(dá)有何具體不同?二者的表達(dá)呈怎樣的變化關(guān)系及臨床意義?這些問題的解答對(duì)進(jìn)一步揭示Leptin在糖尿病慢性皮膚潰瘍難愈合機(jī)制中的作用具有非常重要的意義。 基于已有研究結(jié)果及對(duì)上述問題的思考，我們采用以醫(yī)院為基礎(chǔ)的病例對(duì)照研究，選取糖尿病慢性皮膚潰瘍、非糖尿病慢性皮膚潰瘍及正常人皮膚組織為研究

6、對(duì)象，通過采集上述潰瘍邊緣皮膚組織及正常人皮膚組織制作病理切片，觀察其組織學(xué)區(qū)別。應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)Leptin及其功能受體OB-RL在三組皮膚組織中的表達(dá)，觀察它們的定位表達(dá)特征。應(yīng)用RT-PCR的方法，半定量檢測(cè)三組皮膚組織Leptin及其受體mRNA的表達(dá)水平，擬結(jié)合分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)一步探討Leptin及其功能受體在糖尿病慢性皮膚潰瘍形成及難愈合機(jī)制中的作用，并探討兩種蛋白表達(dá)的臨床意義，為進(jìn)一步預(yù)防和治療糖尿病慢性皮膚潰瘍提

7、供新的實(shí)驗(yàn)資料。 瘦素及其受體在糖尿病慢性皮膚潰瘍組織中表達(dá)及臨床意義的研究【目的】 觀察瘦素(Leptin)及其受體OB-RL在糖尿病慢性皮膚潰瘍邊緣皮膚組織中的表達(dá)特征并與正常皮膚組織和非糖尿病慢性皮膚潰瘍進(jìn)行對(duì)比，探討Leptin及其受體在糖尿病慢性皮膚潰瘍發(fā)生及難愈合機(jī)制中的作用和臨床意義。 【方法】 1．以年齡、性別匹配的糖尿病慢性皮膚潰瘍、非糖尿病慢性皮膚潰瘍的潰瘍邊緣皮膚組織各10例為實(shí)驗(yàn)對(duì)

8、象，以正常人皮肽組織為對(duì)照。 2．潰瘍患者組記錄潰瘍形成時(shí)間。 3．采用HE常規(guī)染色觀察三組皮膚基本組織學(xué)變化。 4．免疫組織化學(xué)方法觀察三組Leptin及OB-RL蛋白的定位和表達(dá)差異。 5．半定量逆轉(zhuǎn)錄PCR法檢測(cè)糖尿病慢性皮膚潰瘍組及正常對(duì)照組Leptin及OB-RL兩種mRNA的表達(dá)。 6．統(tǒng)計(jì)分析兩種蛋白表達(dá)量與潰瘍形成時(shí)間的關(guān)系。 【結(jié)果】 1、糖尿病慢性皮膚潰瘍組及非

9、糖尿病慢性皮膚潰瘍組的潰瘍邊緣皮膚組織均具有典型的組織學(xué)改變，與正常皮膚清晰的表皮復(fù)層結(jié)構(gòu)、豐富且規(guī)則、致密的膠原排列形成了鮮明的組織學(xué)反差。正常皮膚組、非糖尿病慢性皮膚潰瘍組和糖尿病慢性皮膚潰瘍組的表皮層厚度分別為0.99±0.23mm、1.75±0.42mm、1.63±0.33mm，真皮層厚度分別為2.71±0.38mm、1.43±0.38mm、1.38±0.41。mm。兩組潰瘍邊緣皮膚組織表皮層厚度與正常對(duì)照組皮膚相比均明顯增厚、

10、真皮層厚度均明顯變薄，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，(均P<0.01)。 2、Leptin及其受體OB-RL在正常對(duì)照組、非糖尿病慢性皮膚潰瘍組和糖尿病慢性皮膚潰瘍組邊緣皮膚組織的表皮基底層細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、皮脂腺細(xì)胞、汗腺細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞膜和胞漿中均有表達(dá)。Leptin在三組中的陽性細(xì)胞率分別為36.5±4.8％、68.6±9.2％和61.0±7.6％，兩潰瘍組表達(dá)較正常皮膚組相比差異有顯著性意義(均P<0.01)，組間無顯著性差

11、異。OB-RL在三組中的陽性細(xì)胞率分別為36.2±5.1％、75.4±6.31％和22.4±5.09％，糖尿病慢性皮膚潰瘍邊緣皮膚組織中OB-RL的表達(dá)較另外兩組均明顯減少(均P<0.01)。OB-RL在非糖尿病慢性皮膚潰瘍邊緣皮膚組織炎性細(xì)胞中呈大量強(qiáng)陽性表達(dá)與非糖尿病慢性皮膚潰瘍相比差異顯著。3、糖尿病慢性潰瘍組皮膚組織Leptin mRNA及OB-RLmRNA的基因表達(dá)水平均較正常人皮膚組減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

12、 4、糖尿病慢性皮肽潰瘍出現(xiàn)時(shí)間與Leptin蛋白的表達(dá)無相關(guān)關(guān)系(r=0.142P>0.05)，與OB-RL蛋白表達(dá)則呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.663 P<0.05)。 【結(jié)論】 1.糖尿病慢性皮膚潰瘍不缺乏Leptin蛋白的表達(dá)。與非糖尿病慢性皮膚潰瘍難愈合機(jī)制不同，受體OB-RL表達(dá)下調(diào)導(dǎo)致Leptin修復(fù)信號(hào)不能正常傳遞可能是其愈合延遲的重要原因之一； 2.慢性創(chuàng)面的Leptin可能主要來自脂肪組織，