抗菌肽對基因Fas-FasL的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、抗菌肽(APMs)是一種新型的抗生素藥物，屬于小分子多肽，具有廣譜抗菌活性，對真菌，細菌，病毒及癌細胞均有很強的殺傷作用，而且不會引起病原菌的耐藥性?？梢约涌靷诘挠?，提高集體的免疫力，可以作為免疫調(diào)節(jié)因子，維持機體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定與平衡。
　　本實驗需要檢測的目標基因是Fas/FasL，F(xiàn)as位于細胞膜表面的跨膜受體，其配體FasL與其結(jié)合可以啟動細胞凋亡信號的傳導，啟動細胞凋亡程序。據(jù)有關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)as/FasL凋亡途徑與腫瘤

2、免疫逃逸有關(guān)，F(xiàn)as依賴性細胞凋亡途徑是由Fas受體與它的配體FasL的同源性相互作用調(diào)節(jié)的。正常情況下，活化的T淋巴細胞以外的分泌體產(chǎn)生的FasL與腫瘤細胞表面的死亡受體Fas結(jié)合，可以啟動腫瘤細胞的程序性死亡。除此之外，F(xiàn)as/FasL基因還可以充當機體免疫調(diào)節(jié)因子，當機體受到外來信號刺激時，表達FasL分子的細胞就會與攜帶Fas抗原的細胞結(jié)合，輔助免疫細胞維持機體免疫穩(wěn)態(tài)。本文著重介紹了用不同濃度的抗菌肽處理體外培養(yǎng)的巨噬細胞RA

3、W，以及人工喂養(yǎng)小鼠，然后在細胞水平及動物水平檢測目標基因Fas/FasL表達量的變化，來驗證抗菌肽對免疫調(diào)節(jié)的影響。涉及到的實驗內(nèi)容如下:
　　首先進行MTT細胞毒性實驗，用不同濃度的抗菌肽處理巨噬細胞RAW以及成正常體細胞纖維細胞3T3，在不同的時間點檢測細胞活力值的變化情況，來說明抗菌肽對免疫細胞的影響，然后利用試劑盒提取藥物處理過的兩種細胞的RNA，經(jīng)過逆轉(zhuǎn)錄，PCR擴增，及實時定量PCR，檢測細胞內(nèi)部Fas/FasL基因

4、各自的變化趨勢。
　　其次，提取經(jīng)過抗菌肽處理過的細胞的總蛋白，對其進行Western blot蛋白水平半定量檢測，觀察由Fas/FasL編碼翻譯表達的蛋白量的變化，來進一步驗證抗菌肽對基因Fas/FasL的影響。
　　最后，利用流式細胞儀檢測從動物組織提取出來的免疫細胞，利用帶有不同熒光物質(zhì)的Fas，F(xiàn)asL抗體與目標蛋白的結(jié)合，通過檢測熒光強度來說明目標蛋白表達量的變化趨勢?；騀as/FasL表達量及其編碼蛋白表達量的