TNF-α對體外培養(yǎng)仔豬睪丸支持細(xì)胞中Fas-FasL表達(dá)的調(diào)節(jié).pdf

1、支持細(xì)胞(Sertoli cells，SCs)是維持睪丸免疫豁免功能的重要體細(xì)胞，主要通過形成血睪屏障(BTB)、高表達(dá)FasL、分泌免疫抑制因子（如TGF-β、IL-1、IGF-Ⅱ等）來實(shí)現(xiàn)其免疫豁免功能。腫瘤壞死因子(TNF)屬TNFSFL家族成員，包括TNF-α和TNF-β兩種類型，睪丸中主要分泌的是TNF-α。TNF-α通過與SCs上的受體結(jié)合，影響SCs分泌功能，調(diào)節(jié)FSH誘導(dǎo)的SCs生精功能和SCs參與的BTB的開閉及SCs

2、免疫調(diào)節(jié)因子的分泌，進(jìn)而影響SCs的各種功能。但目前TNF-α是調(diào)節(jié)SCs中Fas/FasL系統(tǒng)的表達(dá)的機(jī)制還不完善。本研究的目的是探索TNF-α對SCs中Fas/FasL的表達(dá)的影響以及調(diào)節(jié)Fas/FasL表達(dá)的分子機(jī)制。
　　本研究以體外培養(yǎng)的仔豬睪丸SCs為研究材料，用TNF-α處理培養(yǎng)的SCs，采用CCK-8細(xì)胞增殖檢測試劑盒檢測TNF-α對SCs增殖的影響，利用流式細(xì)胞術(shù)檢測TNF-α對SCs周期進(jìn)程的變化和細(xì)胞早期凋亡

3、的影響;用Western blot和熒光定量PCR技術(shù)檢測Fas/FasL、MMP-2/MMP-9和TIMP-2/TIMP-1蛋白水平及其mRNA豐度表達(dá)的變化;然后利用ELISA試劑盒檢測TNF-α對IL-1β、IL-6、IGF-1、TGF-β1等細(xì)胞因子表達(dá)的影響。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn):
　　(1)用不同濃度的TNF-α(0.1、1、10、25、50、100、200ng/mL)處理SCs不同時(shí)間(6、12、24、36、48

4、、72h)后，SCs的增殖活力具有濃度和時(shí)間依賴性，其作用效果在濃度為50ng/mL、作用時(shí)間為36h時(shí)最強(qiáng)，細(xì)胞的增殖活力最低，極顯著抑制了SCs的增殖，促進(jìn)了細(xì)胞的凋亡(P＜0.01);
　　(2) TNF-α（50ng/mL）顯著促進(jìn)了Fas/FasL蛋白水平及mRNA的表達(dá)(P＜0.01);
　　(3) TNF-α(50ng/mL)顯著促進(jìn)了MMP-2/MMP-9蛋白和mRNA的表達(dá)(P＜0.05);
　　(4

5、) TNF-α（1ng/mL）顯著促進(jìn)TIMP-1mRNA的表達(dá)(P＜0.01)，TNF-α（50ng/mL）極顯著降低TIMP-1和TIMP-2 mRNA的表達(dá)(P＜0.01);
　　(5) TNF-α（50ng/mL）促進(jìn)了IL-1β和IL-6和分泌，抑制了IGF-1和TGF-β1的分泌(P＜0.05)。
　　總之，TNF-α通過促進(jìn)細(xì)胞促炎性因子IL-1β、IL-6的分泌，抑制TIMP-1和TIMP-2的表達(dá)，增強(qiáng)MM