茯苓種質(zhì)資源多樣性與代料栽培技術(shù)初步研究.pdf

1、本文采用酯酶同工酶和ISSR分子標(biāo)記技術(shù)，對(duì)我國(guó)茯苓栽培菌株及部分野生菌株的遺傳多樣性進(jìn)行了分析，并開(kāi)展了茯苓代料栽培技術(shù)的研究。主要研究結(jié)果如下： 對(duì)茯苓27個(gè)供試菌株進(jìn)行酯酶同工酶分析，共檢測(cè)到了186條酯酶同工酶譜帶，每個(gè)菌株所具有的酶帶數(shù)為5～9條不等，多數(shù)為6～8條，27個(gè)供試菌株共有17種酶譜類型，其中部分菌株之間酶譜完全相同。聚類分析結(jié)果表明，在81％的相似水平上，供試的27個(gè)菌株可分為七個(gè)大類。第一類：Y1(寶山

2、)、云苓1號(hào)、5.78、茯苓3號(hào)、A9、A10、岳西、T1、901、Z(z)、50864、靖洲28、GD和GZ；第二類：PO、華中、鄂1號(hào)和茯苓28；第三類：SD；第四類： 50478、神苓1號(hào)(S1)、SC、50876和DB；第五類有：閩006號(hào)；第六類有：L；第七類：Z(1)。部分菌株之間相似系數(shù)為1.0，表明它們親緣關(guān)系很近，這些菌株可能存在同物異名現(xiàn)象。 采用來(lái)源不同的4個(gè)茯苓菌株對(duì)40個(gè)ISSR引物進(jìn)行篩選，選擇擴(kuò)增穩(wěn)

3、定、多態(tài)性較好的12個(gè)引物用于ISSR分析。在正交優(yōu)化擴(kuò)增體系和篩選退火溫度的基礎(chǔ)上，用12條引物對(duì)27個(gè)茯苓菌株進(jìn)行ISSR指紋圖譜分析，共擴(kuò)增出85條DNA帶，其中多態(tài)性帶64條，占總帶數(shù)的75.29％，平均每個(gè)引物擴(kuò)增出7.1條帶。聚類分析表明，在82％的相似水平上，27個(gè)茯苓菌株可分為六個(gè)大類。第一類：Y1(寶山)、A9、50478、Z(z)、鄂1號(hào)、Z(1)、50864、DB、901、5.78、GZ、GD、云苓1號(hào)、茯苓3號(hào)、

4、岳西、華中、茯苓28、靖洲28、A10、T1；第二類：野生菌株P(guān)0和閩006號(hào)；第三類：山東SD；第四類：安徽的野生菌株L；第五類：50876和S1；第六類：四川的SC菌株。 ISSR分析進(jìn)一步驗(yàn)證了酯酶同工酶分析的結(jié)果，同時(shí)也彌補(bǔ)了酯酶同工酶在蛋白質(zhì)水平上分析的不足。ISSR和酯酶同工酶分析的結(jié)果，同時(shí)將野生菌株L、山東菌株SD及福建菌株閩006各自劃為獨(dú)立的三個(gè)類群中，并且均將GZ和GD，云苓1號(hào)和茯苓3號(hào)，Z(z)和508

5、64，S1與50876等菌株歸為相似系數(shù)較高的同類中。但I(xiàn)SSR分析結(jié)果與酯酶同工酶分析結(jié)果在一定程度上也存在著差異。首次應(yīng)用ISSR標(biāo)記技術(shù)對(duì)茯苓進(jìn)行菌株鑒定和種質(zhì)資源多樣性分析，表明ISSR標(biāo)記技術(shù)具有簡(jiǎn)便、高效，多態(tài)性高，重復(fù)性好的特點(diǎn)，在茯苓菌株鑒別及親緣關(guān)系分析中具有較高的應(yīng)用價(jià)值。 茯苓代料栽培技術(shù)研究表明，以松木屑、松木碎塊作為代料栽培的主要原料，采用栽培地搭置低矮簡(jiǎn)易棚，試驗(yàn)效果較好，其茯苓引疤接種成活率達(dá)92.