葛根素預處理減輕大鼠心肌缺血再灌注損傷的機制探討.pdf

1、目的：探討葛根素預處理減輕大鼠心肌缺血再灌注損傷的作用機制是否通過改變eNOS蛋白表達及其磷酸化，以及可能的信號傳導通路。
　　方法：成年雄性SD大鼠90只，隨機分為5組，每組18只，分別是假手術(Sham)組、缺血再灌注(Control)組、葛根素預處理(PUE)組、LY294002(LY)組、LY294002+葛根素(LY+PUE)組。采用開胸結扎左冠狀動脈前降支(LAD)的方法復制大鼠心肌缺血再灌注損傷模型，缺血45min，

2、再灌注120min。經(jīng)BL-420E生物機能實驗系統(tǒng)分別測定缺血前、缺血45min以及再灌注60min、120min時的左心室收縮壓(Left ventricular systolic pressure，LVSP)、左心室舒張末壓(Left ventrieular end diastolic pressure，LVEDP)、左室內壓變化最大上升和下降速率(Maximum rate of left ventricular pressure

3、 development and decay，±dp/dtmax)。再灌注結束后用1％TTC（2，3，5—氯化三苯基四氮唑）染色測定各組心肌梗死面積。采用 ELISA試劑盒測定血漿肌酸激酶(CK-MB)活力和血漿肌鈣蛋白I(cTnI)濃度水平。采用Western Blot方法分別檢測各組心臟缺血區(qū)與非缺血區(qū)eNOS總蛋白表達、eNOS Ser1179位點、eNOS Ser635位點、eNOS Thr497位點的磷酸化水平，Akt總蛋白表

4、達和Akt Thr308位點、Akt Ser473位點的磷酸化水平。采用化學比色法檢測心肌組織NO的含量。
　　結果：與Sham組比較，Control組各時間點心肌收縮及舒張功能逐漸降低，心肌梗死面積增加，血漿CK-MB、cTnI含量明顯升高（P<0.05）；與Control組比較，PUE組各時間點心肌收縮及舒張功能降低程度明顯減輕，心肌梗死面積明顯減少，血漿 CK-MB、cTnI含量明顯降低（P<0.05）。在心肌缺血區(qū)，與Sh

5、am組比較，Control組Akt Thr308、Ser473的磷酸化水平顯著升高（P<0.05），而eNOS、Akt總蛋白表達及其eNOS Ser1179、Ser635、Thr497位點的磷酸化水平差異無統(tǒng)計學意義；與Control組比較，PUE組eNOS Ser1179、Ser635，Akt Thr308、Ser473的磷酸化水平顯著升高（P<0.05）；LY+PUE組較PUE組eNOS Ser1179、Akt Thr308、Ser

6、473磷酸化水平下降（P<0.05），而PUE組和LY+PUE組兩組eNOS Ser635磷酸化水平差異無統(tǒng)計學意義；各組間eNOS、Akt總蛋白表達及eNOS Thr497磷酸化水平差異無統(tǒng)計學意義。在心肌非缺血區(qū)，LY組、LY+PUE組較其他3組eNOS Ser1179及Akt Thr308、Ser473磷酸化水平顯著下降（P<0.05）；各組間eNOS、Akt總蛋白表達及eNOS Ser635、Thr497磷酸化水平差異無統(tǒng)計學意