葛根素預(yù)處理減輕大鼠心肌缺血再灌注損傷的機(jī)制探討.pdf

1、目的：探討葛根素預(yù)處理減輕大鼠心肌缺血再灌注損傷的作用機(jī)制是否通過(guò)改變eNOS蛋白表達(dá)及其磷酸化，以及可能的信號(hào)傳導(dǎo)通路。
　　方法：成年雄性SD大鼠90只，隨機(jī)分為5組，每組18只，分別是假手術(shù)(Sham)組、缺血再灌注(Control)組、葛根素預(yù)處理(PUE)組、LY294002(LY)組、LY294002+葛根素(LY+PUE)組。采用開(kāi)胸結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支(LAD)的方法復(fù)制大鼠心肌缺血再灌注損傷模型，缺血45min，

2、再灌注120min。經(jīng)BL-420E生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)分別測(cè)定缺血前、缺血45min以及再灌注60min、120min時(shí)的左心室收縮壓(Left ventricular systolic pressure，LVSP)、左心室舒張末壓(Left ventrieular end diastolic pressure，LVEDP)、左室內(nèi)壓變化最大上升和下降速率(Maximum rate of left ventricular pressure

3、 development and decay，±dp/dtmax)。再灌注結(jié)束后用1％TTC（2，3，5—氯化三苯基四氮唑）染色測(cè)定各組心肌梗死面積。采用 ELISA試劑盒測(cè)定血漿肌酸激酶(CK-MB)活力和血漿肌鈣蛋白I(cTnI)濃度水平。采用Western Blot方法分別檢測(cè)各組心臟缺血區(qū)與非缺血區(qū)eNOS總蛋白表達(dá)、eNOS Ser1179位點(diǎn)、eNOS Ser635位點(diǎn)、eNOS Thr497位點(diǎn)的磷酸化水平，Akt總蛋白表

4、達(dá)和Akt Thr308位點(diǎn)、Akt Ser473位點(diǎn)的磷酸化水平。采用化學(xué)比色法檢測(cè)心肌組織NO的含量。
　　結(jié)果：與Sham組比較，Control組各時(shí)間點(diǎn)心肌收縮及舒張功能逐漸降低，心肌梗死面積增加，血漿CK-MB、cTnI含量明顯升高（P<0.05）；與Control組比較，PUE組各時(shí)間點(diǎn)心肌收縮及舒張功能降低程度明顯減輕，心肌梗死面積明顯減少，血漿 CK-MB、cTnI含量明顯降低（P<0.05）。在心肌缺血區(qū)，與Sh

5、am組比較，Control組Akt Thr308、Ser473的磷酸化水平顯著升高（P<0.05），而eNOS、Akt總蛋白表達(dá)及其eNOS Ser1179、Ser635、Thr497位點(diǎn)的磷酸化水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與Control組比較，PUE組eNOS Ser1179、Ser635，Akt Thr308、Ser473的磷酸化水平顯著升高（P<0.05）；LY+PUE組較PUE組eNOS Ser1179、Akt Thr308、Ser

6、473磷酸化水平下降（P<0.05），而PUE組和LY+PUE組兩組eNOS Ser635磷酸化水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；各組間eNOS、Akt總蛋白表達(dá)及eNOS Thr497磷酸化水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在心肌非缺血區(qū)，LY組、LY+PUE組較其他3組eNOS Ser1179及Akt Thr308、Ser473磷酸化水平顯著下降（P<0.05）；各組間eNOS、Akt總蛋白表達(dá)及eNOS Ser635、Thr497磷酸化水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意