左奧硝唑氯化鈉注射液兩種給藥方案的臨床藥物代謝動(dòng)力學(xué)及藥動(dòng)學(xué)-藥效學(xué)研究.pdf

1、左奧硝唑是5-硝基咪唑類藥物奧硝唑的左旋體，它在體內(nèi)主要以具有細(xì)胞毒作用的原藥和具有細(xì)胞毒作用的中間產(chǎn)物作用于細(xì)菌的DNA，使其螺旋結(jié)構(gòu)斷裂或阻斷其轉(zhuǎn)錄復(fù)制而致其死亡達(dá)到抗菌目的。左奧硝唑具有良好的抗厭氧菌作用，其抗菌活性與奧硝唑基本相似，對(duì)脆弱擬桿菌、多形擬桿菌、消化球菌和消化鏈球菌、梭桿菌、牙齦類桿菌等厭氧菌均有較好的抗菌活性。左奧硝唑的中樞神經(jīng)毒性明顯低于奧硝唑，其中右奧硝唑是引起奧硝唑中樞神經(jīng)毒性的主要原因。
　　左奧硝唑

2、的Ⅰ期臨床耐受性試驗(yàn)表明左奧硝唑單次給藥劑量在500-1500mg內(nèi)較安全。健康受試者每次0.5g，每日兩次連續(xù)5日靜脈滴注左奧硝唑氯化鈉注射液，結(jié)果顯示左奧硝唑在體內(nèi)存在一定的蓄積。左奧硝唑的初步PK分析顯示若將給藥方案由500mg，q12h改為750mg，q24h后，其體內(nèi)積蓄因子可從1.93降低至1.3。上述結(jié)果結(jié)合左奧硝唑?qū)捬蹙腗IC結(jié)果建議本品目前500mg，q12h的給藥方案可改為750mg，q24h。但此僅為初步研究結(jié)

3、果，尚需進(jìn)一步的臨床驗(yàn)證。
　　左奧硝唑目前的藥動(dòng)學(xué)研究尚沒有進(jìn)行左奧硝唑代謝產(chǎn)物和左奧硝唑尿排泄的研究，同時(shí)缺乏PK/PD研究結(jié)果。奧硝唑在人體尿液中的Ⅰ相代謝產(chǎn)物有5個(gè)，M1（1-氯-3-（2-羥甲基-5-硝基-1-咪唑基）-2-丙醇）和M2（2-甲基-5-硝基咪唑）均由奧硝唑氧化得到， M4（3-（2-甲基-5-硝基-1-咪唑基）-1，2-丙二醇）由奧硝唑咪唑環(huán)側(cè)鏈氯的水解得到，M3（N-（3-氯-2-羥丙基）乙酰胺）和M5

4、（乙酰胺）由奧硝水解后咪唑環(huán)裂解得到。南京圣和藥業(yè)有限公司已研制出奧硝唑的這5個(gè)代謝產(chǎn)物，本研究將補(bǔ)充左奧硝唑代謝產(chǎn)物在人體內(nèi)的PK研究，同時(shí)進(jìn)行左奧硝唑原藥及其代謝產(chǎn)物在尿液中的排泄研究，以研究左奧硝唑在體內(nèi)的物料平衡。
　　本研究將開展左奧硝唑氯化鈉注射液兩種給藥方案500mg，q12h和750mg，q24h在健康受試者體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究，比較兩種給藥方案的PK特征和安全性，并進(jìn)行PK/PD研究，優(yōu)化給藥方案，為Ⅳ臨床試

5、驗(yàn)給藥方案的制定提供依據(jù);同時(shí)進(jìn)行左奧硝唑代謝產(chǎn)物在人體內(nèi)PK過程的研究。
　　本研究包括以下三個(gè)部分:
　　第一部分同時(shí)檢測(cè)血漿、尿液中左奧硝唑及其代謝產(chǎn)物濃度的LC-MS/MS檢測(cè)方法的建立及驗(yàn)證
　　本部分建立了同時(shí)測(cè)定血漿及尿液中左奧硝唑及其代謝產(chǎn)物M1、M2和M4藥物濃度的LC-MS/MS方法(M3和M5采用本方法的檢測(cè)效果不理想)。采用WatersUPLC超高效液相色譜儀和API4000 QTRAP質(zhì)譜儀（

6、AB SCIEX公司）。固定相為:ACQUITY CSH C18色譜柱(2.1 mm×50 mm;1.7μm);檢測(cè)血漿和尿液樣本的流動(dòng)相均為乙腈:0.1％甲酸溶液梯度洗脫。以直接蛋白沉淀法和液-液萃取法預(yù)處理血漿與尿液樣本，內(nèi)標(biāo)為甲硝唑。APCI源正離子多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)，左奧硝唑檢測(cè)通道:m/z220.0→127.5，M1檢測(cè)通道:m/z236.2→170.9，M2檢測(cè)通道:m/z127.9→110.7，M4檢測(cè)通道:m/z202

7、.5→127.7，內(nèi)標(biāo)檢測(cè)通道:m/z172.1→127.8。
　　該方法測(cè)定血漿和尿液中的左奧硝唑的線性范圍均為(0.0100-5.00)μg/mL，定量下限均為0.0100μg/mL; M1的線性范圍均為(0.00500-2.50)μg/mL，定量下限均為0.00500μg/mL; M2的線性范圍均為(0.0200-10.0)μg/mL，定量下限均為0.0200μg/mL;M4的線性范圍均為(0.00250-1.25)μg/m

8、L，定量下限均為0.00250μg/mL?？瞻籽獫{和尿液對(duì)左奧硝唑、M1、M2和M4的基質(zhì)效應(yīng)因子分別為96.3±8.9％和106.1±2.2％、114.1±2.1％和98.1±2.0％、92.7±3.0％和101.9±3.0％、98.8±5.2％和102.1±1.9％。血漿溶液和尿液溶液中，左奧硝唑、M1、M2和M4的提取回收率分別為104.5±3.5％和108.3±8.2％、97.7±4.4％和104.7±4.5％、105.4±3.

9、9％和112.0±6.9％、91.3±3.5％和87.7±5.9％。左奧硝唑血漿和尿液的日內(nèi)重現(xiàn)性RSD分別為≤5.1％和≤10.8％，回收率分別為(91.1～105.1)％和(98.1～100.9)％;日間測(cè)定結(jié)果RSD分別為≤9.3％和≤6.4％，回收率分別為(96.2～101.2)％和(92.8～105.6)％。M1的日內(nèi)重現(xiàn)性RSD分別為≤8.7％和≤8.2％，回收率分別為(95.8～103.8)％和(96.9～107.9)％;

10、日間測(cè)定結(jié)果RSD分別為≤8.6％和≤7.1％，回收率分別為(104.2～105.7)％和(99.1～109.2)％。M2的日內(nèi)重現(xiàn)性RSD分別為≤12.2％和≤5.8％，回收率分別為(87.8～96.8)％和(95.1～102.7)％;日間測(cè)定結(jié)果RSD分別為≤9.7％和≤9.4％，回收率分別為(91.5～103.2)％和(95.9～104.0)％。M4的日內(nèi)重現(xiàn)性RSD分別為≤8.9％和≤8.1％，回收率分別為(96.8～100.6

11、)％和(103.7～105.9)％;日間測(cè)定結(jié)果RSD分別為≤7.2％和≤7.0％，回收率分別為(96.5～103.2)％和(97.9～105.5)％。左奧硝唑和代謝產(chǎn)物M1、M2、M4儲(chǔ)備液及內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液-40±5℃放置5個(gè)月穩(wěn)定。左奧硝唑和代謝產(chǎn)物M1、M2、M4血漿及尿溶液高、中、低及LLOQ濃度質(zhì)控樣本室溫放置24h穩(wěn)定，預(yù)處理后放置48h穩(wěn)定，-40±5℃冰箱凍融3次前后濃度基本相同;上述血漿質(zhì)控樣本-40±5℃長(zhǎng)期放置至3個(gè)月

12、穩(wěn)定，尿液樣本-40±5℃長(zhǎng)期放置至4個(gè)月穩(wěn)定。左奧硝唑血漿樣本10倍稀釋后回收率為110.5±4.1％，尿液樣本10和100倍稀釋后回收率分別為103.5±1.8％和98.2±3.6％; M1血漿樣本的回收率為103.7±6.8％，尿液樣本的回收率分別為118.9±5.1％和101.2±3.2％。M2血漿樣本的回收率為104.9±4.1％，尿液樣本10倍稀釋后的回收率為93.9±3.4％。M4血漿樣本的回收率為106.8±1.3％，尿

13、液樣本的回收率分別為111.0±2.1％和97.6±1.8％。
　　本實(shí)驗(yàn)建立了同時(shí)測(cè)定血、尿樣本中左奧硝唑及其代謝產(chǎn)物M1、M2和M4濃度的LC-MS/MS分析方法，該測(cè)定方法簡(jiǎn)便、快速、靈敏度高，可用于該藥藥動(dòng)學(xué)研究中生物樣本的檢測(cè)。
　　第二部分健康中國(guó)受試者單劑和多劑靜脈滴注左奧硝唑氯化鈉注射液500mg，q12h和750mg，qd的耐受性和藥代動(dòng)力學(xué)研究
　　本研究為單中心、開放、平行給藥試驗(yàn)設(shè)計(jì)，評(píng)價(jià)健康中

14、國(guó)受試者單次和多次連續(xù)靜脈滴注左奧硝唑氯化鈉注射液500 mg和750mg的藥動(dòng)學(xué)特征和安全性。
　　共入組24例中國(guó)健康受試者（男女各半），隨機(jī)分為500mg劑量組和750mg劑量組。兩組受試者均在第1日單次給予左奧硝唑氯化鈉注射液（首劑），按時(shí)留取72h內(nèi)的血、尿樣本，進(jìn)行單劑藥動(dòng)學(xué)研究;第4-10日連續(xù)多次給藥（共7日），第11日單次給予左奧硝唑氯化鈉注射液（末劑），期間按時(shí)留取血、尿樣本，并觀察其安全性，進(jìn)行左奧硝唑的多劑

15、藥動(dòng)學(xué)研究;整個(gè)試驗(yàn)周期為14日。所有血、尿樣本采用LC-MS/MS方法測(cè)定左奧硝唑原藥及其代謝產(chǎn)物M1、M2和M4的濃度。采用Phoenix WinNonlin6.0軟件以非房室模型和房室模型計(jì)算原藥PK參數(shù)，并計(jì)算首劑和末劑給藥后0～72h內(nèi)各時(shí)間段尿排出量和累積尿排出率，同時(shí)計(jì)算主要代謝產(chǎn)物在血漿和尿液中的含量及比例。
　　結(jié)果:①受試者單次靜脈滴注500mg左奧硝唑，左奧硝唑的Cmax為12.5±3.4μ g/mL，AUC

16、0-72h為174±40μg·h/mL，t1/2為11.6±0.8h，代謝物M1和M4的Cmax分別為0.118±0.043μg/mL和0.131±0.027μg/mL，代謝比率MR分別為2.12±0.53％和2.57±0.13％;左奧硝唑、M1、M2和M4的累計(jì)尿排出率Ae0-24h分別為7.62±1.91％、0.702±0.172％、0.117±0.072％和1.72±0.18％。受試者單次靜脈滴注750mg左奧硝唑氯化鈉注射液，左

17、奧硝唑的Cmax為17.3±2.2μg/mL，AUC0-72h為262±48μg·h/mL，t1/2為11.9±1.3h，M1和M4的Cmax分別為0.150±0.060μg/mL和0.184±0.030μg/mL，MR分別為1.67±0.47％和2.45±0.38％;左奧硝唑、M1、M2和M4的累計(jì)尿排出率Ae0-24h分別為7.54±3.08％、0.717±0.352％、0.080±0.030％和1.32±0.75％。兩劑量組代謝物

18、M2在血漿中的濃度均低于檢測(cè)限(0.0200μg/mL)。②左奧硝唑多次給藥后，750mg組的Cmax_ss和AUC0-∞與500mg組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而Cmin_ss比500mg組降低了44.8％，CLss比500mg組增加了38.6％，Vss比500mg組增加了42.5％，蓄積比AR是500mg組的64.0％，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)果顯示與500mg，q12h給藥方案相比，750mg，qd給藥可以減少左奧硝唑在

19、體內(nèi)的蓄積。受試者末劑靜脈滴注500mg左奧硝唑，左奧硝唑、M1、M2和M4的尿累積排出率Ae0-24h分別為19.7±4.6％、2.81±1.08％、0.357±0.190％和5.17±0.57％;受試者末劑靜脈滴注750mg左奧硝唑，左奧硝唑、M1、M2和M4的Ae0-24h分別為14.3±20.4％、2.22±3.76％、0.152±0.045％和3.49±5.28％。③500mg組和750mg組中女性受試者左奧硝唑的Cmax和A

20、UC0-τ均高于男性受試者，500mg組的蓄積比AR女性高于男性，而750mg組AR的性別差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明500mg，q12h連續(xù)給藥可以使女性受試者有較高的藥物蓄積;兩劑量組中左奧硝唑原藥的尿排出藥動(dòng)學(xué)參數(shù)間的性別差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。④兩組受試者給予左奧硝唑后均未出現(xiàn)嚴(yán)重不良事件。500mg組共發(fā)生AE4例6例次，其中胃部不適1例1例次，實(shí)驗(yàn)室檢查異常的AE共3例5例次。本組無(wú)臨床ADR，實(shí)驗(yàn)室異常ADR3例5例次。750mg組共

21、發(fā)生AE5例7例次，臨床AE為3例4例次，實(shí)驗(yàn)室檢查異常的AE3例4例次，其中1例同時(shí)伴臨床和實(shí)驗(yàn)室AE。該10號(hào)受試者于靜脈滴注后第2日出現(xiàn)牙齦根尖膿腫，血常規(guī)檢查中性粒細(xì)胞升高，采取藥物治療，該受試者終止，判斷與試驗(yàn)藥物可能無(wú)關(guān)。本組無(wú)臨床ADR，實(shí)驗(yàn)室ADR共2例3次。兩組受試者給藥前后血壓和心率等生命體征、12-導(dǎo)聯(lián)心電圖檢查均無(wú)顯著差異。
　　綜上所述，左奧硝唑500mg和750mg單劑給藥后藥動(dòng)學(xué)特征相似;多劑給藥顯示

22、與500mg，q12h相比，750mg, qd可以明顯降低左奧硝唑在體內(nèi)的蓄積;左奧硝唑及其代謝產(chǎn)物M1、M2和M4的尿排出率較低，在體內(nèi)沒有達(dá)到物料平衡;500mg，q12h和750mg，qd給藥方案的安全性良好。
　　第三部分左奧硝唑氯化鈉注射液的藥動(dòng)學(xué)/藥效學(xué)研究及給藥方案評(píng)價(jià)
　　左奧硝唑?yàn)?-硝基咪唑類抗菌藥，與甲硝唑相仿，應(yīng)同屬濃度依賴型抗菌藥，其PK/PD參數(shù)為Cmax/MIC和AUC/MIC。左奧硝唑500

23、mg和750 mg給藥方案的PK數(shù)據(jù)來自第二部分，AUC0-24分別為393.4±104.1和298.2±45.6 mg·h/L，均為末劑給藥值，其中500mg組根據(jù)2×AUC0-12得到。左奧硝唑?qū)Υ嗳鯏M桿菌、其他擬桿菌、艱難梭菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、大消化鏈球菌的MIC90分別為0.5 mg/L、2 mg/L、0.25 mg/L、2mg/L和1 mg/L。上述AUC0-24結(jié)果結(jié)合左奧硝唑?qū)捬蹙腗IC90結(jié)果，應(yīng)用Monte Carl

24、o模擬，計(jì)算左奧硝唑這兩種給藥方案(500mg，q12h和750mg，q24h)在穩(wěn)態(tài)血藥濃度下對(duì)厭氧菌主要病原菌的累積反應(yīng)百分比及不同MIC水平下的藥效學(xué)達(dá)標(biāo)概率。
　　研究顯示:750mg，q24h給藥和500mg，q12h兩種給藥方案對(duì)脆弱擬桿菌及其他擬桿菌、艱難梭菌、產(chǎn)氣莢膜梭桿菌、大消化鏈球菌等達(dá)到AUC0-24h/MIC=70靶值的CFR均大于99.9％。另外，對(duì)不同MIC水平下PTA計(jì)算結(jié)果顯示，當(dāng)病原菌的MIC≤2