CD44v2-CD44v10及CD44s在胰腺癌的表達(dá)及其預(yù)后研究.pdf

1、一、研究背景
　　胰腺癌(Pancreatic carcinoma,PCa)毫無疑問是目前最惡性也最致命的腫瘤。早期轉(zhuǎn)移至局部區(qū)域淋巴結(jié)和經(jīng)血液循環(huán)轉(zhuǎn)移至遠(yuǎn)處器官可能是導(dǎo)致其5年生存率極低的原因(小于5％,為所有腫瘤中最低)。針對(duì)胰腺癌的腫瘤成瘤和進(jìn)展,眾多分子被廣泛的描述和研究,CD44就是最重要的分子之一。
　　CD44的結(jié)構(gòu)和功能都非常復(fù)雜,該分子是由20個(gè)外顯子編碼,通過選擇性剪接而產(chǎn)生CD44標(biāo)準(zhǔn)體(CD44s)和

2、CD44變異體(CD44v)。CD44標(biāo)準(zhǔn)體由CD44外顯子1至外顯子5及外顯子16至外顯子20組成。而 CD44變異體分為CD44v1-CD44v10(CD44v1在人類不表達(dá)),分別由對(duì)應(yīng)的外顯子6至外顯子15編碼而成,這些外顯子可以通過選擇性剪接單個(gè)的或多個(gè)的和CD44的標(biāo)準(zhǔn)體組合進(jìn)而可能產(chǎn)生數(shù)千種不同的CD44亞型,每種CD44亞型可能作用不同,因此,CD44結(jié)構(gòu)和功能都很復(fù)雜。
　　CD44最早被認(rèn)為是一種淋巴細(xì)胞歸巢受

3、體和跨膜糖蛋白,表達(dá)于胚胎干細(xì)胞,造血干細(xì)胞及腫瘤干細(xì)胞。盡管CD44在很多細(xì)胞的進(jìn)程,包括細(xì)胞增殖,分化,運(yùn)動(dòng)等方面發(fā)揮重要作用,關(guān)于CD44變異體和標(biāo)準(zhǔn)體在腫瘤中發(fā)揮的作用卻眾說紛紜,觀點(diǎn)不一。在一些腫瘤中,CD44變異體和標(biāo)準(zhǔn)體被認(rèn)為是腫瘤促進(jìn)因子,但在另外一些腫瘤中,有報(bào)道卻認(rèn)為CD44變異體和標(biāo)準(zhǔn)體是腫瘤抑制因子。這些相互較為矛盾的結(jié)論筆者認(rèn)為一是由于他們針對(duì) CD44的研究方法不一,例如有些用免疫組化(immunohisto

4、chemistry, IHC)有些用 PCR方法;二是在不同腫瘤中研究對(duì)象為不同的CD44變異體或亞型。CD44在胰腺癌的作用仍然有所爭議。Tsukuda, H報(bào)道CD44v6和 CD44v2表達(dá)在胰腺癌患者的胰液中,但是作者也報(bào)道正常人群的胰液也表達(dá)CD44v。Rall,C. J.研究了21例臨床胰腺癌組織 CD44的表達(dá),發(fā)現(xiàn)有 CD44v6, CD44v8-9,CD44v8-10和CD44s的表達(dá),其中僅CD44v6的表達(dá)與胰腺癌

5、的轉(zhuǎn)移相關(guān)。Tomaszewska, R則研究發(fā)現(xiàn)胰腺癌有CD44v6和CD44s的表達(dá)。Gotoda, T等人通過免疫組化方法研究了 CD44v6,CD44v2和 CD44s在胰腺癌的表達(dá),發(fā)現(xiàn) CD44v6和CD44v2是預(yù)測不良預(yù)后的有用指標(biāo)。然而,沒有報(bào)道發(fā)現(xiàn)CD44s和胰腺癌的進(jìn)展有相關(guān)。
　　實(shí)際上,到目前為止,尚無系統(tǒng)性的在胰腺癌研究CD44的所有亞型的報(bào)道。為了研究CD44的所有亞型表達(dá)模式是否與胰腺癌的轉(zhuǎn)移和預(yù)后

6、相關(guān),我們用一種新的方法設(shè)計(jì)了CD44所有亞型(包括CD44v2-CD44v10和CD44s)的特異引物,在101例臨床胰腺癌標(biāo)本中檢測了CD44所有亞型的表達(dá),分析了他們的表達(dá)模式與胰腺癌的臨床因素,預(yù)后之間的相關(guān)關(guān)系。
　　二、研究方法
　　1.在第三軍醫(yī)大學(xué),西南醫(yī)院肝膽外科共收集了101例胰腺癌患者,所有收集的臨床標(biāo)本的患者均進(jìn)行了治愈性的胰十二指腸切除術(shù)或保留幽門的胰十二指腸切除術(shù),均清掃了淋巴結(jié),時(shí)間跨度從200

7、8年至2010年。上述收集的病例均未進(jìn)行放療或者化療。這些患者標(biāo)本的CD44v2-CD44v10和CD44s及相關(guān)詳細(xì)的臨床資料得以分析。
　　2. As(Aspc-1),Cf(Cfpac-1)和Pa(Panc-1)三株胰腺癌細(xì)胞株從中國科學(xué)院上海細(xì)胞所購買,所有的細(xì)胞以10%胎牛血清配以雙抗(青霉素、鏈霉素)培養(yǎng),培養(yǎng)溫度為37度,5%CO2,我們用transwell的方法對(duì)這些細(xì)胞的侵襲能力進(jìn)行了檢測。
　　3.我們用實(shí)

8、時(shí)定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)方法對(duì)101例患者的新鮮冰凍標(biāo)本的CD44v2-CD44v10和CD44s的表達(dá)作了檢測,我們用卡方檢驗(yàn)分析了它們的表達(dá)量與患者的臨床相關(guān)資料的相關(guān)性,相關(guān)數(shù)據(jù)若為正態(tài)分布方差齊性則用T檢驗(yàn),否則我們采用非參數(shù)檢驗(yàn)。單因素生存分析采用KM法(KM method),多因素分析采用Cox多因素逐步回歸(向前,極大似然法)。P值小于0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。<

9、br>　　三、研究結(jié)果
　　1.在三株胰腺癌細(xì)胞中,CD44v的表達(dá)量由高到低依次為As,Cf和Pa,而CD44s的表達(dá)量由高到低依次是 Pa,Cf和 As,表明胰腺癌細(xì)胞表達(dá)不同水平的 CD44v和CD44s。另外,細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)表明As細(xì)胞的侵襲力最高,Cf次之,Pa的侵襲力最低。以上的這些結(jié)果表明 CD44v的高表達(dá)和 CD44s的低表達(dá)可能和胰腺癌細(xì)胞的侵襲力相關(guān)。在患者標(biāo)本中,與非腫瘤組織相比,胰腺癌組織表現(xiàn)出CD44v的

10、高表達(dá)和CD44s的低表達(dá)(其中CD44v5,CD44v6,CD44v9,CD44v10和CD44s有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異)。另外,在轉(zhuǎn)移性的標(biāo)本中也發(fā)現(xiàn)了 CD44v的高表達(dá)和 CD44s的低表達(dá)(其中 CD44v6和CD44s有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異)。
　　2.在101例臨床組織中,CD44v6+和CD44v9+和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移肝轉(zhuǎn)移,TNM分期相關(guān),而 CD44s-和肝轉(zhuǎn)移,分化程度,TNM分期相關(guān)。然而,其他 CD44亞型如CD44v2-CD44

11、v5+,CD44v7+,CD44v8+和CD44v10+未發(fā)現(xiàn)與臨床參數(shù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性。
　　3. KM生存曲線分析發(fā)現(xiàn)CD44v6+和CD44v9+的患者有更低的臨床生存。相反, CD44s-患者也有更低的臨床生存。CD44v2-CD44v5+,CD44v7,CD44v7和CD44v10+為發(fā)現(xiàn)對(duì)生存有影響。而且,CD44v6+/CD44s-和 CD44v9+/CD44s-的患者的生存率比單獨(dú)表達(dá)CD44v6+, CD44v9+

12、和CD44s-的更低,而CD44v6+/CD44v9+的患者并沒有比單獨(dú)表達(dá)CD44v6+和CD44v9+更低的生存時(shí)間。
　　4.單因素生存分析發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,血管侵犯,肝轉(zhuǎn)移,TNM分期,單獨(dú)和聯(lián)合表達(dá)CD44v6+,CD44v9+和CD44s-均是影響胰腺癌生存的危險(xiǎn)因素。進(jìn)而,多因素生存分析發(fā)現(xiàn)只有CD44v6+/CD44s-和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響胰腺癌生存的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。
　　四、研究結(jié)論
　　在所有的CD44亞