胃癌幽門螺桿菌L型感染與腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究.pdf

1、目的：研究幽門螺桿菌L型（helicobacter pylori L-form，Hp-L型）感染對(duì)胃癌侵襲、轉(zhuǎn)移能力的影響，探討Hp-L型在胃癌發(fā)展中的作用和可能機(jī)制。
　　方法：將胃癌BGC-823細(xì)胞與幽門螺桿菌L型按1：20、1：100、1：500的不同比例共培養(yǎng)24小時(shí),進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)。①應(yīng)用具有聚碳酸酯和重建基底膜（基質(zhì)膠， matrigel）的transwell小室細(xì)胞侵襲模型，觀察與Hp-L型作用后胃癌BGC-823細(xì)

2、胞的侵襲能力；②應(yīng)用免疫組化（SP法）方法檢測(cè)胃癌 BGC-823細(xì)胞埃茲蛋白（ezrin）、和基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP2）的表達(dá)情況；③應(yīng)用westen-blotting實(shí)驗(yàn)測(cè)定胃癌BGC-823細(xì)胞ezrin和MMP2蛋白表達(dá)量的變化；④應(yīng)用革蘭染色及免疫組化（SP）法檢測(cè)120例胃癌組織中的Hp-L型感染情況；⑤應(yīng)用免疫組化（SP）法檢測(cè)胃癌組織中的ezrin和MMP2的表達(dá)。比較胃癌組織Hp-L型感染陽(yáng)性組和陰性組上述指標(biāo)的表達(dá)

3、結(jié)果；分析Hp-L型感染與ezrin、MMP2表達(dá)的關(guān)系以及和臨床病理因素之間的關(guān)系，進(jìn)一步探討Hp-L型感染對(duì)胃癌侵襲、轉(zhuǎn)移生物學(xué)行為的影響以及Hp-L型在胃癌發(fā)展中的作用。
　　結(jié)果：①Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)隨著胃癌BGC-823細(xì)胞與Hp-L型細(xì)菌的濃度比例增大，胃癌 BGC-823細(xì)胞穿透重建基底膜的數(shù)量逐漸增多,3次實(shí)驗(yàn)結(jié)果其穿膜細(xì)胞數(shù)分別為：37±4.9、45.3±5.9、56.6±5.6和61.3±4.5，經(jīng)

4、單因素方差分析，穿透重建基底膜的胃癌細(xì)胞數(shù)量在不同實(shí)驗(yàn)組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=24.78,P<0.01）。②細(xì)胞爬片免疫組化染色可見(jiàn)，隨胃癌細(xì)胞與細(xì)菌比例增大，ezrin和MMP2陽(yáng)性的胃癌BGC-823細(xì)胞數(shù)逐漸增加，在3次實(shí)驗(yàn)中，每張爬片的每1000個(gè)細(xì)胞中 ezrin陽(yáng)性的細(xì)胞數(shù)分別為：283.67±42.5、454.5±51.7、651.5±54.4和814.5±44.3，經(jīng)單因素方差分析,各組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=1

5、36.2，P<0.01)。每張爬片的每1000個(gè)細(xì)胞中MMP2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)分別為:282.7±47.4、444.8±48.8、596.3±31.7和795.3±36.4，經(jīng)單因素方差分析,各組之間差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=164.4，P<0.01)。③Westen-blotting實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，隨著胃癌BGC-823細(xì)胞與Hp-L型比例增大，胃癌BGC-823細(xì)胞中ezrin和MMP2的表達(dá)量逐漸增加,呈細(xì)菌濃度依賴性。④120例胃癌組織中有8

6、8例革蘭染色檢出Hp-L型，其陽(yáng)性率為73.3％（88/120）；免疫組化Hp-L型抗原表達(dá)陽(yáng)性率為70.8％（85/120），革蘭染色Hp-L型檢出和Hp-L型抗原表達(dá)同時(shí)陽(yáng)性的病例有82例（兩者同時(shí)陽(yáng)性者為Hp-L型陽(yáng)性），其陽(yáng)性率為68.3％。革蘭染色切片發(fā)現(xiàn)Hp-L型可散在分布于癌性腺腔、癌巢和間質(zhì)中，亦可聚集于其中,并見(jiàn)到Hp-L型黏附于胃癌細(xì)胞表面或位于癌細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)的現(xiàn)象。Hp-L型形態(tài)多樣，有圓形、短桿狀、臘腸樣等，但大多

7、為原球體。⑤胃癌組織中Hp-L型陽(yáng)性組的ezrin和MMP2表達(dá)陽(yáng)性率分別為70.73%（58/82）和74.39%（61/82），均高于Hp-L型陰性組的ezrin和MMP2表達(dá)陽(yáng)性率42.1%（16/38）、39.47%（15/38），均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均為 P<0.005）。經(jīng)四格表資料χ2檢驗(yàn)，胃癌組中 Hp-L型陽(yáng)性與ezrin、MMP2的陽(yáng)性表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.27, r=0.34，均為P<0.001）。⑥胃癌中Hp-L型陽(yáng)