自發(fā)三陰乳腺癌小鼠模型研究.pdf

1、研究目的：
　　1.通過比較43例三陰乳腺癌和156例非三陰乳腺癌患者臨床病理資料和預(yù)后生存，回顧性分析研究三陰乳腺癌的臨床病理特征和影響其預(yù)后生存的因素。
　　2.通過檢測津白2(Tientsin Albinao2 strain，TA2)小鼠乳腺癌生物學(xué)行為及免疫表型特征，比較分析TA2小鼠乳腺癌與人三陰乳腺癌的特征。并通過分析妊娠對TA2小鼠乳腺癌生長的影響及小鼠乳腺癌病毒(mouse mammary tumorviru

2、s，MMTV)與TA2小鼠乳腺癌發(fā)生的關(guān)系，研究TA2小鼠乳腺癌發(fā)生的機(jī)制。
　　方法：
　　1.第一部分研究選取于天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院病理科1997-2004年間乳腺浸潤性導(dǎo)管癌手術(shù)治療的臨床和病理資料完整的患者199例，比較三陰乳腺癌患者與非三陰乳腺癌患者臨床病理學(xué)指標(biāo)(年齡、腫瘤大小、腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、治療方式、局部復(fù)發(fā)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移)之間是否存在差異，運(yùn)用Kaplan-Meier生存分析比較兩組患者的生存預(yù)后情況。
　　

3、2.收集TA2自發(fā)乳腺癌小鼠33只，觀察TA2小鼠乳腺癌生物學(xué)行為，H&E染色觀察自發(fā)乳腺癌形態(tài)學(xué)特征，免疫組織化學(xué)染色檢測ERα、PR、p53、PCNA、CylinD1和CK5/6在乳腺癌組織的表達(dá)。取TA2小鼠乳腺癌細(xì)胞瘤株接種于妊娠TA2小鼠，檢測妊娠環(huán)境下腫瘤的生長；電化學(xué)方法檢測小鼠血清雌二醇與孕酮濃度。電鏡觀察TA2乳腺癌組織中小鼠乳腺癌病毒的表達(dá)。使用組織基因組DNA提取試劑盒(DP304-02，Tianjin，China

4、)提取基因組DNA。采用Tirzol法(Invitrogen，USA)提取TA2乳腺癌小鼠癌組織、妊娠小鼠乳腺癌組織和乳腺組織及正常TA2乳腺組織總RNA，逆轉(zhuǎn)錄至cDNA，Real-timePCR檢測MMTV的3’端長末端重復(fù)序列(Long terminal repeat，LTR)mRNA的表達(dá)量，并檢測妊娠期小鼠乳腺癌組織的ERα、PR mRNA表達(dá)量。
　　結(jié)果：
　　1.199名乳腺癌患者中三陰乳腺癌占21.6％，非

5、三陰乳腺癌占78.4％，其中位年齡分別為47歲和51歲。11.6％的三陰乳腺癌患者年齡小于40歲，在非三陰乳腺癌中為7.7％。確診時(shí)三陰乳腺癌的腫瘤直徑均大于2cm，而16.0％的非三陰乳腺癌的腫瘤直徑未超過2cm，二者在腫瘤體積上的差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=8.432，P=0.015)。術(shù)后病理檢查顯示三陰乳腺癌與非三陰乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=3.815，P=0.148)，三陰乳腺癌臨床分期多為Ⅱ或Ⅲ期，而非三陰乳腺癌臨

6、床Ⅰ期占20.5％，二者的臨床分期差別有意義，但組織學(xué)分級差別沒有顯著性。術(shù)前4.7％三陰乳腺癌患者接受了化療，而僅1.3％非三陰乳腺癌患者有術(shù)前化療。術(shù)后55.8％三陰乳腺癌患者接受了化療，有44.9％非三陰乳腺癌患者接受了化療，兩者術(shù)后、術(shù)前化療差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=1.619，P=0.230；x2=1.943，P=0.205)。
　　隨訪過程中4.7％的三陰乳腺癌患者出現(xiàn)局部轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)，在非三陰乳腺癌中為1.9％，兩組患者的

7、腫瘤轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)率無差別(x2=1.024，P=0.295)。其中三陰乳腺癌中6名(14.0％)患者出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，包括多部位轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移部位主要為肺、肝、骨及腦，出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的比例顯著大于非三陰乳腺癌的3.8％(x2=6.077，P=0.024)。Kaplan-Meier生存分析表明三陰乳腺癌預(yù)后較非三陰乳腺癌差(x2=29.098，P=0.000)。
　　2.TA2小鼠乳腺癌組織形態(tài)與人浸潤性乳腺癌相似，癌細(xì)胞為形態(tài)相近的小圓細(xì)胞，分化程

8、度低，核分裂象多見，癌巢中央易出現(xiàn)壞死，不表達(dá)ER，PR和HER2，呈三陰表型，部分乳腺癌細(xì)胞表達(dá)p53，CyclinD和PCNA，在TA2小鼠自發(fā)乳腺癌組織內(nèi)其表達(dá)水平也較高。
　　小鼠乳腺癌動(dòng)物模型組織H&E染色證實(shí)轉(zhuǎn)移灶腫瘤細(xì)胞與原發(fā)灶在形態(tài)上存在一致性。取小鼠腫瘤細(xì)胞皮下接種于妊娠小鼠，待成瘤后測量腫瘤大小，腫瘤生長曲線顯示妊娠組腫瘤生長速度顯著高于對照組(t=4.142，P=0.000)。電化學(xué)檢測結(jié)果顯示妊娠TA2小鼠

9、和自發(fā)乳腺癌小鼠血清孕酮水平均顯著高于正常小鼠的(P均<0.01)。而妊娠期TA2小鼠乳腺組織較其乳腺癌組織高表達(dá)ERα和PRmRNA(t=12.245，10.933，P=0.000，0.001)。妊娠組腫瘤組織內(nèi)瘤細(xì)胞增殖更活躍，分裂象多見。與對照組乳腺癌相比，妊娠組瘤組織內(nèi)PCNA陽性率都較對照組高。
　　電鏡觀察顯示TA2小鼠乳腺癌細(xì)胞內(nèi)存在MMTV病毒顆粒。Real-time PCR結(jié)果顯示在妊娠TA2小鼠乳腺和其乳腺癌組

10、織內(nèi)的MMTV LTR表達(dá)水平高于正常TA2乳腺癌組織內(nèi)的表達(dá)量，三者間有顯著差異(P均=0.001)。
　　結(jié)論：
　　1.三陰乳腺癌多發(fā)生于年輕女性，尤以絕經(jīng)前女性多見。且確診時(shí)原發(fā)腫瘤體積較大，分期較晚，易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，生存時(shí)間較非三陰乳腺癌短，生活質(zhì)量差。
　　2.TA2小鼠自發(fā)乳腺癌的生物學(xué)行為，病理形態(tài)特征及免疫表型均與人三陰乳腺癌極為相似，是研究人三陰乳腺癌的一個(gè)良好動(dòng)物模型。
　　3.TA2小鼠乳