二甲基苯蒽誘導的小鼠乳腺癌模型研究.pdf

1、乳腺癌是目前公認的女性第二大殺手,乳腺癌動物模型對于乳腺癌病因研究和治療、藥物篩選與評價均具有重要的意義。二甲基苯蒽(DMBA)誘導大鼠乳腺癌模型較為成熟,但在小鼠體內(nèi)能否成功建立乳腺癌模型研究較少。
　　本文目的是探索 DMBA能否在小鼠體內(nèi)成功誘導乳腺癌,為研究乳腺癌發(fā)病機制和評價中藥治療乳腺癌的特色優(yōu)勢提供良好的動物模型。
　　本研究采用C57BL/6小鼠灌胃二甲基苯蒽(DMBA)橄欖油溶液50 mg/kg,每周1次,

2、連續(xù)5周的造模方式誘導小鼠乳腺癌模型。通過觀察實驗期間小鼠乳腺腫瘤潛伏期、發(fā)生率、生存期、外觀、體溫、自主活動、外耳微循環(huán)變化及血液流變學指標,評價乳腺癌小鼠模型的中醫(yī)學體征變化;通過組織切片HE染色法、SABC免疫組化染色法,觀察小鼠乳腺癌組織不同時期形態(tài)學變化及TGF-β1含量表達,同時與臨床病理切片相比較,評價小鼠乳腺癌生物學特性與臨床乳腺癌的相似性;通過給予以附子為主藥的溫熱處方和以蒲公英為主藥的寒涼處方進行藥物佐證,檢測能量代

3、謝指標(紅細胞膜Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶)活性、血清雌激素(雌二醇、孕酮)水平、血清細胞因子及其受體(NGF、TrkA、BDNF、TrkB、bFGF、TGF-β1、PAF)和細胞外基質(zhì)(TIMP-1、MMP-9、LN、COLⅠ、Ⅱ、Ⅲ)含量,評價寒熱兩種療法對乳腺癌小鼠的影響。采用MTT法、軟瓊脂克隆實驗、BrdU摻入細胞免疫熒光實驗、健那綠染色實驗、明膠酶譜法、Western-blot方法,觀察DMBA對7

4、701正常肝細胞分裂增殖能力、線粒體變化、MMPs和TGF-β1表達的影響,驗證DMBA誘導正常細胞轉(zhuǎn)化的機制。
　　結(jié)果表明,造模后小鼠隨時間的延長逐漸出現(xiàn)畏寒喜暖、蜷縮少動、體溫下降、外耳微循環(huán)受阻、全血粘度及紅細胞聚集指數(shù)增高、紅細胞ATP酶活性降低、血中雌二醇和孕酮水平升高等狀況,給予藥物干預后以附子為主藥的溫熱處方不僅可以明顯改善上述狀況,而且可以降低血清中細胞因子及其受體水平、細胞外基質(zhì)水平,延長小鼠存活期,阻止腫瘤生

5、長。兩次造模小鼠乳腺腫瘤潛伏期、發(fā)生率、生存曲線相似。
　　組織切片HE染色顯示,DMBA誘導的小鼠乳腺癌發(fā)生是通過正?！錾堑湫驮錾┳儭櫺园┳冎饾u演變的動態(tài)過程,與人體乳腺癌發(fā)展過程相似。免疫組化染色顯示,DMBA誘導的小鼠乳腺癌胞漿中TGF-β1表達與腫瘤惡性程度呈正相關(guān),與臨床人體乳腺癌結(jié)果一致。
　　體外結(jié)果顯示:DMBA對7701正常肝細胞表現(xiàn)出劑量依賴性抑制作用,IC50為42.5μg/mL,在50-

6、100μg/mL濃度范圍內(nèi)可以誘導肝細胞形態(tài)發(fā)生顯著變化。與正常肝細胞相比,經(jīng)DMBA誘導的肝細胞軟瓊脂克隆形成能力明顯提高,BrdU摻入細胞陽性細胞數(shù)明顯增多,細胞內(nèi)線粒體異常、增多。DMBA處理后的肝細胞和正常肝細胞電泳圖譜存在明顯差異,前者與 LLC、4T1細胞蛋白表達相似。明膠酶圖譜顯示經(jīng) DMBA誘導的肝細胞MMP-9和MMP-2活性增加。Western-blot結(jié)果顯示,經(jīng)DMBA誘導的肝細胞TGF-β1表達量明顯高于正常肝