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文檔簡介
1、多氯聯(lián)苯(PCBs)是一類頗受關(guān)注的持久性有機(jī)污染物(POPs),對P450 酶的誘導(dǎo)是其重要的生物效應(yīng)特征。P450 酶在多環(huán)芳烴等外源性化合物的代謝活化過程中扮演重要角色。研究顯示PCBs和多環(huán)芳烴常共存于多種環(huán)境介質(zhì)和人體生物樣本中,因此研究PCBs和多環(huán)芳烴的聯(lián)合作用具有現(xiàn)實(shí)意義。PCB126(3,3',4,4',5–pentachlorobipheny)被認(rèn)為是最具毒性的PCBs 之一,對P450 酶有很強(qiáng)的誘導(dǎo)能力,B(a)
2、P 是第一個被發(fā)現(xiàn)的環(huán)境致癌物和多環(huán)芳烴致癌物,常被做為多環(huán)芳烴化合物的代表。鑒于P450 酶在B(a)P代謝活化過程中扮演的重要角色,PCB126是否能通過誘導(dǎo)代謝酶的活化從而增強(qiáng)B(a)P 對機(jī)體的遺傳毒性呢?本文采用PCB126 預(yù)染毒,然后再和B(a)P 聯(lián)合染毒的方式,探討環(huán)境中共存的這兩種污染物是否會比B(a)P 單獨(dú)存在造成更強(qiáng)的遺傳損傷,而毒性的增強(qiáng)是否歸因于PCBs 可誘導(dǎo)代謝酶這一特性。 本文以來源于人類的代
3、謝酶完全的人肝腫瘤細(xì)胞株HepG2為靶細(xì)胞,設(shè)PCB126 三個劑量(0.01、0.1、1nmol/L),B(a)P 兩個劑量(12.5、25μmol/L),設(shè)二甲基亞砜(DMSO)為溶劑對照,將HepG2細(xì)胞經(jīng)PCB126 預(yù)染毒48h 后,再與B(a)P 聯(lián)合染毒24h。通過熒光分光光度法測定各組細(xì)胞Ⅰ相代謝酶CYP1A1、CYP2B 活性;并采用胞質(zhì)分裂阻滯法微核實(shí)驗(yàn)(CBMNT)分析各組細(xì)胞的微核率(MN‰),并計(jì)算核分裂指數(shù)(
4、NDI),以此探討PCB126 對B(a)P致HepG2細(xì)胞遺傳損傷的影響及其代謝酶機(jī)制。 本文獲得的研究結(jié)果如下: ①CYP1A1 酶活性(以CYP1A1 標(biāo)志酶EROD 活性表示):與DMSO 溶劑對照相比,12.5μmol/L的B(a)P 單獨(dú)作用不引起HepG2細(xì)胞EROD 活性顯著增高,而25μmol/L的B(a)P 可使EROD 活性顯著增高;與B(a)P(12.5、25μmol/L)單獨(dú)作用相比,相同劑量的
5、B(a)P 經(jīng)各濃度PCB126預(yù)染毒后所誘導(dǎo)的EROD 均顯著升高,且隨PCB126 預(yù)染毒濃度的增加而增加。 ②CYP2B 酶活性(以CYP2B 標(biāo)志酶PROD 活性表示):與DMSO 溶劑對照相比,12.5μmol/L的B(a)P 單獨(dú)作用不引起HepG2細(xì)胞PROD 活性顯著增高,而25μmol/L的B(a)P 可使PROD 活性顯著增高;與12.5μmol/L的B(a)P 單獨(dú)作用相比,相同劑量的B(a)P 經(jīng)各濃度P
6、CB126 預(yù)染毒后所誘導(dǎo)的PROD 均顯著升高,且隨PCB126 預(yù)染毒濃度的增加而增加;與25μmol/L的B(a)P 單獨(dú)作用相比,相同劑量的B(a)P 經(jīng)各濃度PCB126預(yù)染毒后所誘導(dǎo)的PROD 無顯著變化。 ③微核誘導(dǎo):與DMSO 溶劑對照相比,12.5、25μmol/L的B(a)P 單獨(dú)作用誘導(dǎo)的微核率均顯著升高;12.5μmol/L的B(a)P 所誘發(fā)的微核率隨PCB126 預(yù)染毒濃度的升高而升高,在PCB126
7、 預(yù)染毒濃度為0.1、1nmol/L時,B(a)P 所誘導(dǎo)的微核率與相應(yīng)濃度的B(a)P 單獨(dú)作用相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的升高;25μmol/L的B(a)P 所誘發(fā)的微核率也隨PCB126 預(yù)染毒濃度的升高而明顯升高,在PCB126 預(yù)染毒濃度為0.01、0.1、1nmol/L時,B(a)P 所誘導(dǎo)的微核率與相應(yīng)濃度的B(a)P 單獨(dú)作用相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的升高。 ④核分裂指數(shù)(NDI):與DMSO 溶劑對照相比,12.5、25μmol
8、/L的B(a)P 單獨(dú)作用均引起NDI 顯著降低;與12.5μmol/L的B(a)P 單獨(dú)作用相比,相同劑量的B(a)P經(jīng)各濃度PCB126 預(yù)染毒后均引起NDI 顯著降低;與25μmol/L的B(a)P 單獨(dú)作用相比,相同劑量的B(a)P 經(jīng)各濃度PCB126 預(yù)染毒后引起的NDI無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 綜上所述,一定劑量的PCB126 能使B(a)P 誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞DNA 損傷作用顯著增強(qiáng),表明PCB126 對B(a)P的遺傳
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