基于小鼠模型的兩種組織干細(xì)胞的相關(guān)研究.pdf

1、第一部分小鼠肺干細(xì)胞的相關(guān)研究
　　 內(nèi)源性肺干細(xì)胞指位于肺組織內(nèi)能自我更新并在特定條件下分化為肺組織的細(xì)胞。肺干細(xì)胞參與肺組織的穩(wěn)態(tài)維持和損傷修復(fù)。在肺內(nèi)，衰老可能通過影響肺干細(xì)胞的再生能力和分化功能導(dǎo)致肺組織結(jié)構(gòu)和功能的變化。衰老是肺纖維化發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。肌成纖維細(xì)胞與肺纖維化的發(fā)生密切相關(guān)。為了探討肺干細(xì)胞與衰老及肺纖維化間的相互關(guān)系，我們進(jìn)行了肺損傷處理、干細(xì)胞分析分選及體外培養(yǎng)。但目前尚無公認(rèn)的肺干細(xì)胞表面標(biāo)記，我

2、們對(duì)遠(yuǎn)端肺組織干細(xì)胞不同表面標(biāo)記分選的肺干細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，比較了（CD31－CD45-Sca-1+CD34+和CD31-CD45-Sca-1-EpCAM+）兩種分選策略。
　　 結(jié)果表明 CD31-CD45-Sca-1-EpCAM+肺干細(xì)胞表面標(biāo)記策略更適合于區(qū)分遠(yuǎn)端肺組織的上皮干細(xì)胞和間質(zhì)干細(xì)胞。我們通過建立肺損傷小鼠模型來研究在肺損傷修復(fù)過程中衰老對(duì)小鼠的肺損傷修復(fù)能力的影響，進(jìn)而探討其肺干細(xì)胞的增殖修復(fù)能力的差異，以期探

3、討肺的損傷修復(fù)機(jī)制。比較不同周齡小鼠的肺干細(xì)胞及肺間質(zhì)干細(xì)胞的數(shù)量，發(fā)現(xiàn)在正常生理狀態(tài)下增齡對(duì)肺干細(xì)胞（包括遠(yuǎn)端肺上皮干細(xì)胞和肺間質(zhì)干細(xì)胞/前體細(xì)胞）的數(shù)量及比例影響不顯著。而在肺損傷修復(fù)過程中，肺上皮干細(xì)胞和肺間質(zhì)干細(xì)胞/前體細(xì)胞的比例下降。在衰老過程中肺損傷修復(fù)的能力存在明顯的減弱趨勢。我們對(duì)不同月齡小鼠的肺組織細(xì)胞中肌成纖維細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行分析，提示在衰老過程中導(dǎo)致肺間質(zhì)干細(xì)胞的組成發(fā)生了變化，向肌成纖維細(xì)胞分化的比例升高。這是肺纖維

4、化發(fā)生的可能機(jī)制之一。
　　 第二部分 RunX3基因敲除對(duì)小鼠骨髓造血干細(xì)胞功能的影響
　　 RunX3（Runt-related transcription factor3，Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子3）基因與細(xì)胞增殖、凋亡、分化有關(guān)，對(duì)免疫系統(tǒng)疾病，癌癥的發(fā)生存在影響。為了研究RunX3基因與造血干細(xì)胞（Haematopoietic stem cells，HSCs）自我更新及分化能力的關(guān)系，我們通過RunX3基因敲除小鼠

5、的競爭性骨髓移植實(shí)驗(yàn)進(jìn)行相關(guān)研究。
　　 競爭性骨髓移植實(shí)驗(yàn)是判斷干細(xì)胞自我更新能力的標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)。移植3月后的受體小鼠利用5-氟尿嘧啶（5-Fluororucail，5-FU）處理以進(jìn)一步確定RunX3基因敲除小鼠的骨髓造血干細(xì)胞在損傷修復(fù)情況下的增殖及分化能力。RunX3-/-小鼠供體來源的外周血髓系細(xì)胞占總外周血髓系細(xì)胞的比例較野生對(duì)照鼠高。5-FU處理一周后RunX3-/-小鼠供體來源外周血中髓系細(xì)胞比例敲除組較野生組高，

6、5-FU處理一月后RunX3-/-小鼠供體來源外周血中B細(xì)胞比例下降。
　　 RunX3-/-小鼠骨髓干細(xì)胞供體來源的外周血細(xì)胞占總外周血細(xì)胞的比例與野生對(duì)照鼠相比無明顯差異。小鼠在正常生理狀態(tài)時(shí)，RunX3基因?qū)υ煅杉?xì)胞穩(wěn)態(tài)維持及其分化影響不明顯。RunX3基因缺失對(duì)骨髓短期和長期造血干細(xì)胞的自我更新能力的影響不顯著，但對(duì)骨髓造血干細(xì)胞向髓系血細(xì)胞的分化能力可能有促進(jìn)作用。在應(yīng)激的早期RunX3基因的缺失可能導(dǎo)致了骨髓造血干