氯化鎂對同型半胱氨酸誘導的大鼠A7r5細胞增殖及MMP-2、MMP-9表達的影響.pdf

1、目的：體外觀察不同濃度的同型半胱氨酸(homocysteine, Hcy)單用和聯(lián)用MgCl2對A7r5細胞增殖及其基質金屬蛋白酶2(matrix metalloproteinase2, MMP-2)和基質金屬蛋白酶9(matrix metalloproteinase9, MMP-9)表達的影響，旨在進一步探討 Hcy致動脈粥樣硬化(artherosclerosis, AS)作用的分子機制及鎂劑治療的理論基礎，為臨床防治AS提供可靠的實

2、驗依據(jù)。
　　方法：⑴將不同濃度的Hcy與A7r5細胞體外共培養(yǎng)48 h,倒置顯微鏡下觀察細胞的形態(tài)學改變；細胞計數(shù)及MTT法檢測不同濃度的Hcy對A7r5細胞增殖的影響；流式細胞術檢測細胞周期變化；逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）和免疫印跡法（Western blot）檢測不同濃度的Hcy對MMP-2、MMP-9 mRNA及其蛋白表達的影響。⑵0.50mmol/L Hcy分別與不同濃度的MgCl2共同作用A7r5細胞48 h后

3、，細胞計數(shù)、MTT法及流式細胞術檢測MgCl2對Hcy誘導的A7r5細胞增殖的影響；RT-PCR和Western blot法檢測不同濃度的MgCl2對Hcy誘導的A7r5細胞MMP-2、MMP-9 mRNA及其蛋白表達的影響。
　　結果：⑴不同濃度的Hcy作用A7r5細胞48 h：①倒置顯微鏡下可見，對照組細胞貼壁生長，呈紡錘狀，細胞數(shù)目相對較少，而實驗組隨著Hcy濃度的升高，細胞數(shù)目逐漸增多，體積增大，生長旺盛，呈增殖表現(xiàn)；②細

4、胞計數(shù)結果顯示，隨著 Hcy濃度增加，A7r5細胞數(shù)目增多，各實驗組與對照組差異具有顯著性(P<0.05)，表明Hcy能促進A7r5細胞增殖；③MTT法結果顯示，隨著Hcy濃度增加，吸光度值逐漸增加，各實驗組與對照組相比，P<0.05；④細胞周期結果顯示，各濃度組 G1期細胞所占比例均低于對照組(P<0.05)，而 S期細胞比例均高于對照組(P<0.05)，表明Hcy能促使A7r5細胞從G1期向S期轉化，DNA合成增加；⑤RT-PCR結

5、果顯示，不同濃度Hcy處理組MMP-2、MMP-9 mRNA的表達逐漸增加，其相對值與對照組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；⑥Western blot結果顯示，Hcy使A7r5細胞MMP-2、MMP-9蛋白表達增加，各濃度組與對照組差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；⑦RT-PCR及Western blot結果均顯示正常對照組中 MMP-2表達多于 MMP-9，MMP-9表達較少，分別為(3.60±1.42)％、(1.60±0.

6、82)%。
　　⑵0.50mmol/L Hcy與不同濃度的MgCl2共同作用A7r5細胞48 h：①細胞計數(shù)結果顯示，A7r5細胞數(shù)目隨MgCl2濃度的不斷加大而減少，其中2.00、3.00mmol/L MgCl2組與對照組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；② MTT法結果顯示，隨著MgCl2濃度增加，吸光度值逐漸減少，各實驗組與對照組相比，P<0.05；③細胞周期結果顯示，MgCl2可抑制Hcy誘導的A7r5細胞從G1期向S期的

7、轉化，使S期細胞比例減少，DNA合成減少，其中2.00、3.00mmol/L MgCl2組與對照組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；④ RT-PCR結果顯示，MgCl2對 Hcy誘導的A7r5細胞MMP-2、MMP-9 mRNA表達增加的效應具有抑制作用，抑制作用隨MgCl2濃度增加而加強，2.00、3.00mmol/L MgCl2組與對照組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；⑤Western blot結果顯示，MgCl2使Hcy誘導的A