尿液中幽門(mén)螺桿菌相關(guān)抗原初步分析.pdf

1、Marshall和Warren于1983年首次分離得到了幽門(mén)螺桿菌(Helicobacter pylori，簡(jiǎn)稱(chēng)H.pylori或HP)，該菌是一種螺旋狀、微需氧、主要定植于人胃粘膜的革蘭陰性菌。隨著研究的深入，越來(lái)越多的研究證據(jù)表明HP感染與慢性活動(dòng)性胃炎、消化性潰瘍、胃癌及粘膜相關(guān)淋巴組織(mucosa-associated lymphoid tissue，MALT)淋巴瘤的發(fā)生密切相關(guān)，1994年WHO將其列為一級(jí)致癌因子。HP感

2、染人群廣泛，在我國(guó)普通人群中感染率達(dá)50％～60％，準(zhǔn)確診斷HP感染是醫(yī)學(xué)界面臨的一個(gè)亟待解決的問(wèn)題。檢測(cè)HP感染的方法可分為侵入性和非侵入性?xún)深?lèi)。侵入性方法指依賴(lài)胃鏡的檢查方法，這些方法均需在胃鏡檢查時(shí)取胃黏膜進(jìn)行檢測(cè)，常用的有細(xì)菌培養(yǎng)、組織病理學(xué)檢查和快速尿素酶試驗(yàn)，其中HP培養(yǎng)為診斷感染的金標(biāo)準(zhǔn)之一，但隨著臨床治療的增加,培養(yǎng)難度加大，同時(shí)需要一定的經(jīng)驗(yàn)和條件，目前多用于科研領(lǐng)域。對(duì)于侵入性檢測(cè)方法，許多患者難以接受，尤其是兒童、

3、老人和孕婦。在非侵入性方法中，血清抗HP IgG抗體檢測(cè)為成熟的檢測(cè)技術(shù)，對(duì)未接受過(guò)正規(guī)抗幽門(mén)螺桿菌治療者的初次診斷效果較好，但不能及時(shí)反映幽門(mén)螺桿菌的根除效果，根治后血清中的HP抗體滴度水平可維持在陽(yáng)性限以上超過(guò)半年。作為另一個(gè)金標(biāo)準(zhǔn)的13C尿素呼氣試驗(yàn)特異性和敏感性均在95％以上，但分析儀器昂貴、收費(fèi)較高；幽門(mén)螺桿菌糞抗原檢測(cè)具有較高的特異性和敏感性，且使用方便、廉價(jià)，省時(shí)，但在根除效果測(cè)定時(shí)易出假陰性結(jié)果，目前用HpSA評(píng)價(jià)HP的

4、根除效果還存在爭(zhēng)議[1]。Soichiro等[2]發(fā)現(xiàn)Hp感染者血、尿中均存在HP抗體，兩者具有較高的一致性，因此，測(cè)定尿HP抗體更為簡(jiǎn)捷方便，但HP抗體陽(yáng)性不能證明有HP的現(xiàn)癥感染，HP抗體陰性也不能排除HP感染的存在，其臨床意義有限，多用于流行病學(xué)調(diào)查。與檢測(cè)循環(huán)抗體相比，抗原的檢出直接反映了病原生物現(xiàn)癥感染的信息。目前，已有多種病原生物相關(guān)的抗原成分能夠從相應(yīng)的患者尿液中檢測(cè)出來(lái)，這些病原生物涉及到寄生蟲(chóng)、細(xì)菌以及病毒。一些抗原成

5、分已經(jīng)作為診斷依據(jù)應(yīng)用于臨床中，如嗜肺軍團(tuán)菌LP抗原，一些抗原成分如結(jié)核菌抗原、巨細(xì)胞病毒以及血吸蟲(chóng)抗原等檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)研究中也取得進(jìn)展，具有開(kāi)發(fā)成為診斷方法的潛在價(jià)值。研究表明，HP定居在胃粘膜上，機(jī)體可以通過(guò)被動(dòng)吸收可溶性細(xì)菌產(chǎn)物，胃粘膜上皮細(xì)胞直接吞飲細(xì)菌抗原，經(jīng)受損的緊密連接轉(zhuǎn)運(yùn)抗原和腸粘膜上皮吸收細(xì)菌抗原而使HP抗原成分入血，但迅速被單核一巨噬細(xì)胞系統(tǒng)清除[3]。目前已有自血清中檢測(cè)出可溶性HP抗原的相關(guān)方法[4]的報(bào)道，但HP感

6、染者尿液中是否有與之相關(guān)的抗原成分至今未見(jiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道，若能夠從尿液中找到與HP感染相關(guān)的抗原成分并建立檢測(cè)方法，則對(duì)HP感染的診斷具有重要意義，同時(shí)也可以為HP與宿主相互作用的機(jī)理及致病機(jī)理的研究方面提供重要的線(xiàn)索。隨著檢測(cè)和鑒定技術(shù)的發(fā)展，高通量、高靈敏度、高自動(dòng)化的儀器不斷推出，大大促進(jìn)了蛋白質(zhì)組學(xué)的發(fā)展，現(xiàn)在，尿液蛋白質(zhì)組學(xué)分析在疾病的診斷、病程的監(jiān)測(cè)和藥物靶點(diǎn)的開(kāi)發(fā)中都具有重要的實(shí)際意義。本研究擬通過(guò)蛋白質(zhì)組學(xué)的技術(shù)方法從幽門(mén)螺

7、桿菌感染者尿液中尋找到并篩選出可能存在的具有診斷價(jià)值的可溶性抗原，找出其在感染人群中的分布規(guī)律并最終確定其是否具有診斷價(jià)值。本研究采用SPE方法和TCA-DOC沉淀法制備尿蛋白，并對(duì)獲得的尿蛋白樣品使用Bradford法和BCA法測(cè)定蛋白含量及SDS-PAGE電泳分析，對(duì)尿蛋白制備方法進(jìn)行了評(píng)價(jià)，并使用nanoLC-MS/MS對(duì)TCA-DOC沉淀法制備的尿蛋白進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)分析，通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)檢索鑒定出尿液樣品中存在的蛋白或多肽成分，在鑒定