棗瘋病生物防治的初步研究.pdf

1、本試驗通過對棗瘋病菌、棗樹及長春花的低溫和超低溫保存，婆棗體內(nèi)植原體的存活動態(tài)，棗樹內(nèi)生菌的分離、檢測及不同來源的內(nèi)生菌在棗樹體內(nèi)運轉(zhuǎn)規(guī)律及棗瘋病植原體拮抗微生物和抗生素的篩選研究，為棗瘋病的生物防治奠定了基礎(chǔ)，主要研究結(jié)果如下： 1棗瘋病菌、棗樹及長春花的低溫和超低溫保存試驗分別采用包埋玻璃化法對棗瘋病組培苗莖尖及帶腋芽莖段、棗樹病愈傷組織、健康婆棗組培苗莖尖及帶腋芽莖段、長春花組培苗莖尖及莖段，玻璃化法對棗瘋病愈傷組織、組培

2、苗帶腋芽莖段，簡單玻璃化法對棗瘋病組培苗、健康婆棗組培苗、長春花組培苗莖尖，一般低溫保存方法對長春花栽培苗莖段進(jìn)行了低溫(-20℃、-76℃、-196℃)保存研究。結(jié)果表明，只有長春花組培苗莖尖在液氮中保存48 h后恢復(fù)培養(yǎng)成功，而在其它溫度及采用其它方法保存時組織材料均死亡；棗樹材料在不同的溫度下，采用不同的保存方法在恢復(fù)培養(yǎng)時組織全部死亡。 2 棗樹體內(nèi)植原體的存活動態(tài)采集越冬期和越冬前后的棗瘋病枝條并對越冬期枝條進(jìn)行水培，

3、通過萌芽的癥狀觀察和PCR檢測，發(fā)現(xiàn)棗瘋病枝條韌皮部和萌芽內(nèi)均可擴(kuò)增出1.5 Kb的植原體特異性條帶，表明棗瘋病植原體可以在-10℃左右的地區(qū)在棗樹地上部枝條內(nèi)安全越冬；利用PCR技術(shù)檢測了冬季輕病樹的病枝、根部、主干及樹冠內(nèi)未表現(xiàn)癥狀的枝條韌皮部，結(jié)果只在病枝內(nèi)檢測到植原體的存在，而在其它部位都未發(fā)現(xiàn)植原體。 3 植物內(nèi)生菌的分離、檢測及不同來源的內(nèi)生菌在棗樹體內(nèi)的運轉(zhuǎn)規(guī)律本文分別從健康婆棗根部和阜平大棗健康果實內(nèi)分離得到內(nèi)生

4、鏈霉菌CN120、CN121。該試驗對棗瘋病組培苗、四環(huán)素處理過的棗瘋病組培苗、阜平大棗健康種子組培苗和健康婆棗外植體組培苗4種材料體內(nèi)的內(nèi)生菌進(jìn)行了顯微鏡觀察和16SrDNA的PCR檢測。結(jié)果顯示，各種材料在顯微鏡1600倍下觀察到了不同形態(tài)和大小的細(xì)菌；分子檢測結(jié)果出現(xiàn)了亮而清晰的1.5 Kb的細(xì)菌DNA條帶，表明上述組織內(nèi)均含有內(nèi)生細(xì)菌。在研究不同來源的內(nèi)生細(xì)菌和內(nèi)生鏈霉菌在棗樹體內(nèi)定殖和運轉(zhuǎn)的規(guī)律時，通過體外接種的試驗方法，分別

5、將CN015r、CN017r、CN122 3個菌株接種于健康婆棗組培苗，在接種后7 d、15 d、30 d時利用平板稀釋法檢測其內(nèi)生性，結(jié)果表明：CN015r、CN017r、CN122都可以進(jìn)入到棗樹組培苗內(nèi)，同一部位隨著時間的增加進(jìn)入植株體內(nèi)的內(nèi)生菌的量有所增加，同一植株在同一時間檢測到的內(nèi)生細(xì)菌的量由莖基到莖中呈逐漸減少的趨勢，項部最少。健康婆棗組培苗經(jīng)四環(huán)素處理30 d后再接種CN017r，30 d后進(jìn)行內(nèi)生性檢測時，莖基部為2.

6、14×10<'9> CFU/g，而未處理苗為1．70×10<'7>CFU/g，表明經(jīng)四環(huán)素處理后的棗組培苗，可培養(yǎng)內(nèi)生細(xì)菌進(jìn)入其體內(nèi)的數(shù)量明顯增加。 4 棗瘋病植原體拮抗微生物和抗生素的篩選以已知對植原體有防治效果的四環(huán)素和土霉素為對照，利用9種細(xì)菌(CN015r、CN017r、CN068、CN078、CHAOr、JM218、WCS358r、WCS358：：phl、WCS417r)，6種鏈霉菌(CN120、CNl21、龜裂鏈霉菌

7、、金色鏈霉菌、武夷菌素鏈霉菌、玫瑰黃鏈霉菌Men-myco-93-63)及其代謝產(chǎn)物和6種抗生素[二乙酰間苯三酚(2,4-diacetylphloroglucinol,DAPG)、氯霉素、利福平、硫酸鏈霉素、酒石酸泰諾菌素和替米考星1對棗瘋病植原體進(jìn)行了拮抗性篩選。棗瘋病組培苗經(jīng)各細(xì)菌、鏈霉菌及其代謝產(chǎn)物和抗生素處理一定時期后觀察，龜裂鏈霉菌菌體處理的棗瘋病苗，第15天時觀察，組培苗生長正常，癥狀無緩解；第30天時觀察，病苗上部葉片變大