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文檔簡介
1、棗(Ziziphus jujuba Mill.)為鼠李科(Rhamnaceae)棗屬(Ziziphus Mill.)植物,是我國特有的寶貴種質(zhì)資源和重要的特色果樹。棗瘋病由植原體(phytoplasma)引起,是棗樹上最嚴(yán)重的毀滅性病害之一。利用抗病種質(zhì)資源,借助分子生物學(xué)手段和方法克隆抗病基因,對開展分子育種具有重要意義。前期研究中本課題組已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在駿棗品種中存在對棗瘋病的抗病和感病品系。本研究利用AFLP和SON-PCR 技術(shù),以駿
2、棗抗病和感病品系為試材,進(jìn)行了基因組水平上的差異表達(dá)分析,并利用獲得的差異片段進(jìn)行了側(cè)翼序列的延伸。主要結(jié)果如下:
1.通過駿棗抗病和感病品系的AFLP分析,獲得了11條差異片段。應(yīng)用56 對選擇性引物對對駿棗的棗瘋病抗性和感病品系進(jìn)行AFLP分析,最終利用篩選出的10 對特異性較好的引物進(jìn)行擴(kuò)增和差異片段的篩選,最終確定并分析了了11條差異片段,其中6條是與抗病相關(guān)的,5條是與感病相關(guān)的。
2.建立了一套適
3、合于棗未知基因側(cè)翼序列擴(kuò)增的SON-PCR 技術(shù)體系。本試驗應(yīng)用傳統(tǒng)的SON-PCR 技術(shù)體系不能獲得理想的試驗結(jié)果,經(jīng)在原有體系基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)和優(yōu)化,即將第二、三輪嵌套擴(kuò)增由原來的一步擴(kuò)增都分為兩步進(jìn)行。主要是將第二、三輪的嵌套擴(kuò)增中的線性延伸單獨列出,從而增加了反應(yīng)的特異性和高效性。試驗證明改進(jìn)后的SON-PCR 體系能夠有效地得到目的差異條帶,獲得理想結(jié)果。
3.利用本試驗建立的改進(jìn)SON-PCR 技術(shù)將一條抗性相關(guān)
4、片段(165bp)延伸到了1119bp。利用改進(jìn)的SON-PCR 技術(shù)將抗性相關(guān)片段R1(165bp)上游延伸了390bp,下游延伸了564bp,拼接后長度為1119bp。利用NCBI數(shù)據(jù)庫,進(jìn)行了Blast 比對分析,此序列與白楊中編碼SAUR 家族蛋白(SAUR3)的mRNA序列有80%的相似性;通過開放閱讀框的尋找,結(jié)果顯示此序列含有一個不完整的開放閱讀框,多個起始密碼子,不含終止密碼子,此部分開放閱讀框編碼161個氨基酸,其中在
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