組織芯片研究OPNmRNA、OCT2mRNA及其蛋白在胃癌中的表達(dá)意義.pdf

1、世界范圍內(nèi)，胃癌是最常見的惡性腫瘤之一，雖然近年其發(fā)病率有下降趨勢(shì)，但在許多國家，胃癌的發(fā)病率和死亡率仍居各類腫瘤之首位，我國情況也基本如此。診治水平的提高使早期胃癌患者的長期生存率有了很大的提高，但是進(jìn)展期胃癌患者的預(yù)后仍然很差。導(dǎo)致大部分胃癌患者死亡的原因并不是原發(fā)灶本身，而是腫瘤產(chǎn)生的侵襲、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)。因此，需要有效的預(yù)后指標(biāo)來確認(rèn)那些有轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的高?；颊?，對(duì)他們進(jìn)行有效的個(gè)性化治療，以提高生存期和生存率。 近年來的分子

2、生物學(xué)研究表明，腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移是一種多基因參與、多階段演進(jìn)的極其復(fù)雜的生物學(xué)過程。參與這一過程的基因或分子，可大致分成五大類，即生長因子及其受體、細(xì)胞周期調(diào)節(jié)素、端粒酶、細(xì)胞粘附分子、基質(zhì)降解酶，其中包括表皮生長因子(EGF)、EGF受體、K-sam、HER-2、IL-8、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)、周期素E、p27、p53、鈣粘附素、CD44v6、基質(zhì)金屬蛋白酶1(MMP-1)及其抑制劑(TIMP-1)等，這些基因或分子都可作

3、為預(yù)后指標(biāo)。最近，文獻(xiàn)報(bào)道了一些與消化道腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移及預(yù)后相關(guān)的基因，包括RBP4、OCT2、IGF2、PFN2、KIAA1093、OPN、PCOLCE及FN等。本實(shí)驗(yàn)對(duì)OPN與OCT2在胃癌中的表達(dá)及與胃癌各臨床病理指標(biāo)的關(guān)系進(jìn)行了研究。 骨橋蛋白(OPN)是一種具有多種功能的分泌型磷酸化糖蛋白，可由多種細(xì)胞，包括骨細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞分泌。骨橋蛋白參與很多生理及病理過程，包括血管生成、細(xì)胞凋亡、炎癥、創(chuàng)傷愈

4、合以及腫瘤的轉(zhuǎn)移。最近，已有充分的證據(jù)表明骨橋蛋白有助于腫瘤細(xì)胞的浸潤及轉(zhuǎn)移，而且有很多研究認(rèn)為腫瘤病人血液或腫瘤組織中的OPN水平能夠?yàn)楣烙?jì)病人的預(yù)后提供有用的臨床信息。OPN在很多腫瘤，包括肺癌、乳腺癌、食道癌、前列腺癌中的表達(dá)情況已有較多報(bào)道，然而OPN促進(jìn)腫瘤浸潤及轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制還不太清楚。 轉(zhuǎn)錄因子OCT2是POU域蛋白轉(zhuǎn)錄因子家族的一員，首先發(fā)現(xiàn)于B淋巴細(xì)胞中，由于它能與免疫球蛋白的啟動(dòng)子及增強(qiáng)子上的八核苷酸序列(o

5、ctamersequence)ATGCAAAT結(jié)合而命名。OCT2通常被認(rèn)為是淋巴細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞的特異性轉(zhuǎn)錄因子，不存在于其他類型的細(xì)胞上。2002年，Yoshitaka等在研究胃癌發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制時(shí)意外地發(fā)現(xiàn)OCT2在伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌細(xì)胞及一些浸潤于間質(zhì)中的淋巴細(xì)胞上有較強(qiáng)的表達(dá)，而在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌細(xì)胞上則未見表達(dá)。 組織芯片(TissueChip，TC)，又稱組織微陣列(TissueMicroarray，TMA

6、)，是一種以形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)的分子生物學(xué)新技術(shù)，它可被應(yīng)用于各種檢測(cè)基因和蛋白在組織細(xì)胞中的定位情況的原位組織技術(shù)實(shí)驗(yàn)，包括組織化學(xué)、免疫組織化學(xué)、免疫熒光以及原位雜交等。組織芯片使我們能在同等條件下同時(shí)快速檢測(cè)大量組織標(biāo)本的形態(tài)學(xué)表達(dá)情況，因此本實(shí)驗(yàn)采用組織芯片技術(shù)來進(jìn)行研究。 本實(shí)驗(yàn)搜集紹興市第一人民醫(yī)院1995年-2000年間的99例手術(shù)切除胃癌標(biāo)本中的原發(fā)灶，并隨機(jī)選取同期25例慢性胃炎或胃潰瘍標(biāo)本作為對(duì)照。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容主要包括

7、復(fù)習(xí)病歷和HE切片，由有經(jīng)驗(yàn)的醫(yī)生核實(shí)臨床病理診斷，選取樣點(diǎn)做成組織芯片，然后分別利用原位雜交及免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)OPN與OCT2在基因水平及蛋白水平的表達(dá)情況，最后結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果、臨床病理資料及隨訪資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 統(tǒng)計(jì)學(xué)采用SPSS11.5軟件包，包括X2檢驗(yàn)、Spearnan等級(jí)相關(guān)分析、Kaplan-Meier生存曲線分析、時(shí)-序檢驗(yàn)等。P值以0.05作為顯著性檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。 原位雜交的結(jié)果表明，99例胃癌中OPN

8、mRNA及OCT2mRNA的陽性表達(dá)率分別為60.61％、64.65％;OPNmRNA的陽性率與腫瘤大小(r=0.295，P=0.003)、浸潤深度(r=0.289，P=0.004)、脈管侵犯(r=0.437，P=0.000)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(r=0.335，P=0.001)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(r=0.288，P=0.004)呈正相關(guān)；OCT2mRNA的陽性率也與腫瘤大小(r=0.354，P=0.000)、浸潤深度(r=0.378，P=0.000)

9、、脈管侵犯(r=0.348，P=0.000)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(r=0.297，P=0.003)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(r=0.253，P=0.011)呈正相關(guān)；OPNmRNA表達(dá)水平與OCT2mRNA呈正相關(guān)；OPNmRNA及OCT2mRNA陽性表達(dá)病例的平均生存時(shí)間和5年生存率均明顯低于陰性表達(dá)的病例。 免疫組化的結(jié)果表明，99例胃癌中OPN蛋白及OCT2蛋白的陽性表達(dá)率分別為60.61％、54.55％;OPN蛋白的陽性率與腫瘤大小(r=0.

10、295，P=0.003)、浸潤深度(r=0.295，P=0.003)、脈管侵犯(r=0.395，P=0.000)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(r=0.293，P=0.003)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(r=0.235，P=0.019)呈正相關(guān)；OCT2蛋白的陽性率也與腫瘤大小(r=0.352，P=0.000)、浸潤深度(r=0.271，P=0.007)、脈管侵犯(r=0.325，P=0.001)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(r=0.292，P=0.003)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(r=0.239，