CaN和NFAT蛋白及其mRNA在慢性氟中毒大鼠骨組織中的表達意義.pdf

1、目的：探討CaN/NFAT信號通路在慢性氟中毒氟骨癥發(fā)病中的作用。
　　方法：將36只SD大鼠按性別和體重隨機分為3組：對照組(飲水含氟<0.5 mg/L)、低氟組(飲水含氟5.0 mg/L)、高氟組(飲水含氟50.0mg/L)，每組12只。實驗8個月后股動脈放血處死大鼠，氟離子選擇電極法檢測尿氟、骨氟含量；收集血清，用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測骨鈣素(BGP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP5b)；HE染色光鏡觀察實驗大鼠

2、骨組織形態(tài)改變；抗酒石酸酸性磷酸酶染色(TRAP)鑒定破骨細(xì)胞(Osteoclast，OC)并計數(shù)；取大鼠股骨下端，用免疫組織化學(xué)法和原位雜交檢測各組大鼠股骨組織中CaN和NFAT蛋白及mRNA表達。
　　結(jié)果：1.氟中毒大鼠模型復(fù)制成功，表現(xiàn)為染氟組大鼠有不同程度氟斑牙發(fā)生，以高劑量組最為嚴(yán)重，各組間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，對照組無氟斑牙形成；與對照組比較，低、高劑量氟中毒組尿氟、骨氟含量明顯升高，各組間比較，差

3、異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　2.ELISA結(jié)果顯示：(1)染氟組大鼠血清BGP升高，各組間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；(2)與對照組比較，低氟組大鼠血清TRACP5b含量增加顯著(P<0.05)，高氟組與對照組比較無統(tǒng)計學(xué)意義，但與低氟組比較降低(P<0.05)。
　　3.病理形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)骨組織呈骨質(zhì)硬化表現(xiàn)，與對照組比較，隨染氟劑量增加，氟中毒組大鼠骨小梁厚度、密度及骨皮質(zhì)厚度均明顯增加,骨小梁間隙

4、逐漸減小，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　4.破骨細(xì)胞的鑒定與計數(shù)：對照組比較，低氟組破骨細(xì)胞數(shù)目增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；高氟組破骨細(xì)胞數(shù)目與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；低氟組與高氟組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　5.免疫組化和原位雜交結(jié)果顯示：(1)與對照組比較，染氟組大鼠成骨細(xì)胞中 CaN和NFAT蛋白及 mRNA表達逐漸增高，各組間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.0

5、5)。(2)與對照組比較，低氟組大鼠破骨細(xì)胞中明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，而高氟組與對照組比較，CaN和NFAT蛋白及mRNA表達無明顯差異(P>0.05)。成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞中，CaN表達與NFAT的表達均呈正相關(guān)性(rOB=0.923，rOC=0.984，P<0.05)。
　　結(jié)論：飲水型慢性氟中毒大鼠模型復(fù)制成功。BGP、TRACP5b可作為慢性氟中毒骨骼病變的代謝指標(biāo)之一。慢性氟中毒大鼠骨組織中CaN和NF