利用組織芯片技術研究p73基因編碼蛋白在胃癌中的表達及意義.pdf

1、前言：近年來發(fā)展的組織微陣列/組織芯片技術是將多個細小組織片整齊排列于同一載體而成的縮微組織切片，具有體積小、信息含量高的特點。適于免疫組織化學和DNA、BNA原位雜交，并能大大提高實驗效率，而且可以根據需要靈活設計，所得結果均一可靠、可比性強。近年來多項研究表明組織微陣列/組織芯片技術在腫瘤病理研究和臨床病理診斷中有廣泛而特殊的用途。 胃癌是我國發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤之一，但其發(fā)病機制目前仍不十分清楚。有研究顯示P73基

2、因異常表達與胃癌的發(fā)生發(fā)展有一定相關性。p73基因和p53基因相似的結構、特殊的定位及相似的功能蛋白而被認為是是侯選的抑癌基因。但近年來許多研究發(fā)現(xiàn)P73基因的高表達改變與經典的抑癌基因失活致癌理論相矛盾，因此有研究者對P73基因是否為抑癌基因提出疑問。P73是一個新發(fā)現(xiàn)的基因，目前它的功能及具體誘導、活化調控機制，特別是在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的作用及與p53基因的關系尚不十分清楚。本文采用免疫組織化學方法觀察胃癌及其癌前病變組織中p73

3、、p53基因編碼蛋白的表達與胃黏膜癌變、侵襲轉移的關系，探討p73、p53基因異常表達在胃癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用機制及相互關系。 目的：構建胃癌及其癌前病變組織芯片，采用免疫組化方法觀察研究p73和mp53基因編碼蛋白在胃癌中的表達及其臨床病理學意義，探討其在胃癌發(fā)生和侵襲轉移中的作用及相關分子病理學機制，期望能進一步闡釋P73基因編碼蛋白在胃癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用和可能的機制，同時將組織芯片這種高通量、平行性好的新技術應用于腫

4、瘤病理學的研究，顯著提高研究工作的效率。 材料與方法臨床資料及組織芯片制作：收集2003-2004年遼寧省腫瘤醫(yī)院和中國醫(yī)大附屬一院104例胃癌及癌前病變組織蠟塊標本，利用組織芯片制作儀(美國)穿取選擇定位的目標組織(組織樣品直徑為1mm)排列在受體蠟塊中，構建成兩個胃癌及其癌前病變的組織芯片蠟塊(蠟塊A共包含101個樣品：癌組織32例，遠端正常組織32例，不典型增生5例，腸化生32例。蠟塊B共包含124個樣品：癌組織72例，遠

5、端正常組織47例，腸化生4例，不典型增生1例)。對2個組織芯片蠟塊行4um連續(xù)切片，其中1張行常規(guī)HE染色，其它保存?zhèn)溆谩?免疫組化染色及結果判定方法：采用SABC免疫組化方法檢測胃癌組織芯片中p73和mp53蛋白的表達。兔抗人P73多克隆抗體(工作濃度1：100)購自武漢博士德生物技術公司，鼠抗人p53單克隆抗體(即用型)及通用型SABC試劑盒購自北京中山生物技術公司。已知陽性組織片做陽性對照，以PBS替代一抗做陰性對照。免疫

6、組化染色結果判定方法：p73蛋白陽性反應顆粒定位于細胞核和細胞質，p53蛋白陽性反應顆粒定位于細胞核。每例標本選擇2個有代表性的高倍視野，計數200個腫瘤細胞，取平均值。陽性細胞數＜5％為陰性(-)，5％-25％為弱陽性(+)，25-50％為中度陽性(++)，＞50％為強陽性(+++)。 統(tǒng)計學分析：本研究所有數據均采用SPSS-12統(tǒng)計學系統(tǒng)軟件處理，進而判斷p73、p53蛋白表達與胃癌及其癌前病變病理生物學行為指標之間的關系

7、，及p73、p53基因編碼蛋白表達的相互關系。P＜0.05視為差異具有顯著性。 結果免疫組化染色結果：胃癌及其癌前病變組織芯片在免疫組織化學染色過程中因高壓熱處理抗原修復有部分脫落，其余組織陽性信號清晰，背景清潔。最終可用病例為遠癌正常胃黏膜28例、腸上皮化生25例、不典型增生5例、胃癌81例。P73蛋白陽性表達定位于細胞核及細胞質，mp53蛋白陽性表達定位于細胞核。 P73蛋白在胃癌及其癌前病變組織中的表達：P73基因

8、編碼蛋白在胃癌組織中的陽性表達率(90.1％)顯著高于遠癌正常胃黏膜(17.9％)，P＜0.01；P73蛋白在腸上皮化生組織中的陽性表達率(44.0％)顯著高于遠癌正常胃黏膜，不典型增生病變組織中P73蛋白陽性表達率(80.0％)顯著高于遠癌正常胃黏膜，P＜0.05，但與腸上皮化生之間無顯著差異。胃癌Bormann大體分型中，Bor.Ⅲ/Ⅳ型胃癌p73蛋白陽性表達率(92.9％/100％)顯著高于Bor.Ⅱ型胃癌(57.1％)，P＜0.

9、05；伴轉移胃癌組p73蛋白陽性表達率(淋巴結轉移組94.4％，肝轉移組100％，卵巢轉移100％)顯著高于無轉移組(76.2％)，P＜0.05。 胃癌組織中P73蛋白與mp53蛋白表達的關系：胃癌組織中P73蛋白表達與mp53蛋白表達密切相關(P＜0.01)，相關系數r=0.286。 結論：1.P73基因編碼蛋白表達與胃黏膜癌前病變及胃癌的惡性病理生物學行為密切相關。P73基因編碼蛋白雖與抑癌基因P53編碼蛋白同源，但