臘梅花蛋白質(zhì)分離純化及性質(zhì)研究.pdf

1、臘梅花外型美觀，抗寒俱香，自古以來都具有極高的食用，藥用保健價值。本文以臘梅花為原料，采用室溫破碎提取，低溫有機(jī)溶劑脫色除雜沉淀，結(jié)合鹽析透析等步驟制備出一定蛋白質(zhì)純度的臘梅花蛋白粉，并考察了制備蛋白粉的抗氧化性能及淀粉酶、蛋白酶活性，擬定了純化制各路線，獲得了從臘梅花中提取制備活性蛋白粉的方法。文章對臘梅花中α-淀粉酶進(jìn)行了分離純化，獲得了一定的純化倍數(shù)及酶得率，考察了臘梅花中α-淀粉酶的最佳反應(yīng)溫度及pH。本文為深入分離開發(fā)該資源提

2、供了一定數(shù)據(jù)支持，其結(jié)論如下： (1)臘梅花中分離制備活性蛋白質(zhì)粉的工藝路線考察。首先比較了丙酮干粉法和緩沖液直接提取法對臘梅花中活性蛋白提取率的影響，選擇緩沖液直接提取法進(jìn)行粗蛋白液提取。進(jìn)一步以蛋白提取率為指標(biāo)，分別考察了離子強(qiáng)度、pH、溫度、料液比、提取時間等因素對提取率的影響，優(yōu)化了提取條件。在對粗蛋白液的純化過程中，考察了丙酮洗脫除雜、硫酸銨鹽析、透析除鹽等工藝對純化效果的影響。獲得蛋白提取工藝參數(shù)為：pH為7.2，溫

3、度為25℃，料液比(W∶V)為1∶6，離子強(qiáng)(NaCl)為0.2M，提取時間為4h可獲得最高的蛋白提取率，達(dá)到了31％。純化效果良好，產(chǎn)品為淺黃白色蛋白濃縮物，純度達(dá)到了66％。 (2)文章進(jìn)一步考察了制備臘梅花中蛋白質(zhì)粉抗氧化能力的強(qiáng)弱及淀粉酶、蛋白酶活性，以期對制備蛋白粉的生物活性功能及酶活性保存能力做出測評。結(jié)果顯示，未滅活制備蛋白粉自由基清除力達(dá)84.7％，蛋白成分滅活后為74.2％，清除率變化不大。在臘梅花水溶劑提取液

4、中，結(jié)果大致相同，未滅活提取液自由基清除率為93.2％，蛋白成分滅活后為81.4％，制備蛋白中蛋白質(zhì)抗氧化能力相對較弱。本章的實驗結(jié)果同時揭示所制備的活性蛋白粉淀粉酶及蛋白酶活性得到了較好的保護(hù)和純化，其分別得到了3.62和1.49倍數(shù)的純化，其中淀粉酶比活力為262.94U·mg-1，蛋白酶比活力為12.32 U·mg-1。 (3)基于上述實驗結(jié)果，臘梅花淀粉酶比活力達(dá)到了262.94U·mg-1，具有較高生物活性，對α一淀粉

5、酶進(jìn)行了分離純化，并對其最佳反應(yīng)溫度及pH進(jìn)行了測定。通過制備臘梅花丙酮干粉，硫酸銨分段鹽析，透析除鹽，聚乙二醇20000濃縮干燥，DEAE52纖維樹脂純化等步驟的考察，獲得DEAE52纖維樹脂對目標(biāo)酶最佳吸附洗脫條件為：最佳樹脂吸附pH為7.5，最佳洗脫離子強(qiáng)度為0.5M NaCl。通過DEAE-52樹脂吸附洗脫后，酶活得到了7.4倍的純化，酶得率為10.4％，得率較高，為一條理想的純化方案。通過對臘梅花中α—淀粉酶最佳反應(yīng)pH值和溫