化學(xué)合成經(jīng)修飾抗TIMP-2 siRNA防治肝纖維化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：①針對(duì)大鼠金屬蛋白酶組織抑制劑.2rnRNA序列設(shè)計(jì)和篩選化學(xué)合成經(jīng)修飾抗TIMP-2小分子干擾RNA；②研究化學(xué)合成經(jīng)修飾抗TIMP-2 siRNA對(duì)肝星狀細(xì)胞合成分泌細(xì)胞外基質(zhì)的影響；③研究TIMP-2基質(zhì)金屬蛋白酶.2和膜型基質(zhì)金屬蛋白酶-1在活化HSCs中的表達(dá)及對(duì)ECM合成分泌的影響；④研究化學(xué)合成經(jīng)修飾抗TIMP-2 siRNA對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)和膽總管結(jié)扎大鼠肝纖維化模型的影響. 方法：①以膠原酶和鏈酶蛋白酶E原

2、位灌流梯度離心法分離純化HSCs；②以不同濃度和在不同時(shí)間點(diǎn)將化學(xué)合成經(jīng)修飾抗TIMP-2siRNA轉(zhuǎn)染活化HSCs,篩選基因沉默效率較高的一對(duì)；③檢測(cè)抗TIMP-2siRNA對(duì)大鼠HSCs活化增殖、合成分泌ECM等生物學(xué)特性的影響；④檢測(cè)抗TIMP-2 siRNA對(duì)HSCs合成分泌MMP-2、MTl-MMP和MMP-13水平的變化；⑤將篩選出一對(duì)化學(xué)合成抗TIMP-2 siRNA分別導(dǎo)入CCl<,4>誘導(dǎo)和膽總管結(jié)扎兩種肝纖維化動(dòng)物模

3、型；⑥檢測(cè)肝功能、血清纖維化標(biāo)志物和肝組織羥脯氨酸含量、HSCs活化指標(biāo)、ECM合成與降解指標(biāo)和肝細(xì)胞增殖指標(biāo),評(píng)價(jià)其對(duì)大鼠肝纖維化的影響. 結(jié)論：①化學(xué)合成經(jīng)修飾抗TIMP-2 siRNA能夠高效抑制TIMP-2的表達(dá),減少HSCs分泌合成ECM,抑制HSCs活化；②TIMP-2通過(guò)MTl-MMP介導(dǎo)MMP-2的活化；抑制TIMP-2的表達(dá),MTl-MMP和MMP-2的表達(dá)隨之降低,而HSCs合成分泌ECM也相應(yīng)減少；③在CC