HPLC和垂直板非連續(xù)SDS-PAGE檢測尿中微量蛋白方法的建立與評價.pdf

1、目的:
　　 1.建立一種快速檢測尿中微量白蛋白的高效液相色譜檢測方法。
　　 2.研究垂直板非連續(xù)SDS-PAGE分析尿蛋白的臨床應(yīng)用價值。
　　 方法:
　　 1.高效液相色譜法:采用新的流動相建立分子篩-高效液相色譜法，測定人血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)液和尿液白蛋白，對該法進行方法學(xué)評價并分析56例糖尿病患者的尿液標(biāo)本。
　　 2.垂直板非連續(xù)SDS-PAGE:用垂直板非連續(xù)SDS-PAGE分析150例

2、患者（糖尿病患者90例，其他疾病患者60例）尿蛋白，并和尿蛋白半定量及尿蛋白(24小時U-Pr)、尿微量白蛋白(MA)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)、β2-微球蛋白(β2-MG)結(jié)果進行分析比較。
　　 結(jié)果:
　　 1.高效液相色譜法:在流速為1.0ml/min，檢測波長205nm時，白蛋白的出峰時間1.7min。標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=1.1872X+21.286，相關(guān)系數(shù)R2=0.9984。線性范圍為(2.

3、5～2000) mg/L，線性回歸方程為:Y=1.191X+21.134，相關(guān)系數(shù)R2=0.9969。檢測低限為2 mg/L。批內(nèi)CV分別為3.98％(20 mg/L)、3.55％(200 mg/L)、4.65％(2000 mg/L)，批間CV分別為4.05％(20 mg/L)、3.60％(200 mg/L)、4.74％(2000 mg/L)。回收率分別為95.3％(100 mg/L)、98.1％(500 mg/L)、97.2％(150

4、0 mg/L)。4 g/L維生素C、40 g/L尿素、4g/L肌酐、40 g/L葡萄糖、20g/L氯化鈉、100 U/ml青霉素鈉對高效液相色譜法無干擾。Hb、膽紅素、IgG有干擾，干擾率分別為Hb:68.2％(143.75 mg/L)、77.5％(287.50 mg/L)、92.1％(575.00 mg/L);膽紅素:12.9％(31.25 mg/L)、16.8％(62.50 mg/L)、20.1％(125.0 mg/L);IgG:2

5、.16％(100 mg/L)、14.7％(150 mg/L)、18.5％(200 mg/L)。
　　 2.垂直板非連續(xù)SDS-PAGE:根據(jù)電泳圖譜可以分為生理性、腎小管性、腎小球性及混合性蛋白尿;與U-Pr、MA、NAG、β2-MG相比，SDS-PAGE的靈敏度相對較高。
　　 結(jié)論:
　　 1.本研究建立了一種快速檢測尿中微量白蛋白的高效液相色譜檢測方法。該法檢測快速，靈敏度高，能檢出更多的微量白蛋白。