用SDS-PAGE和密度掃描定量檢測(cè)小麥單籽粒高、低分子量麥谷蛋白亞基.pdf

1、1.本研究檢測(cè)了高分子量麥谷蛋白亞基(HMW-GS)和低分子量麥谷蛋白亞基(LMW-GS)的提取量隨溫度條件和提取時(shí)間的變化情況。在高溫(90和65℃)時(shí)，HMW-GS和LMW-GS的提取量都很快達(dá)到最大(分別為5min和30min)，延長(zhǎng)提取時(shí)間只能使提取量降低。在較低的溫度條件(-20、4、0、15、18、23、35或50℃)時(shí)，提取量的變化復(fù)雜：在18h內(nèi)，HMW-GS提取量隨提取時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，并且溫度越高提取量越多，但是當(dāng)提

2、取時(shí)間達(dá)到7天時(shí)，最大提取量在-20℃，依次為0℃和4℃，而在18、23、35和50℃時(shí)，HMW-GS提取量降得如此之多以致于不能用Coomassie Brilliant Blue R250檢測(cè)到它們。與HMW-GS相似，27h內(nèi)在較低溫時(shí)LMW-GS的提取量隨時(shí)間的增加而增多，但不隨溫度的增加(從-20到35℃)而增多(它們的提取量相似)，較低溫度提取條件都優(yōu)于高溫(90和65℃)提取條件。當(dāng)提取時(shí)間為7天時(shí)23℃是LMW-GS的最佳

3、的提取溫度。多次把樣品移人-70℃也有利于HMW-GS和IMW-GS的提取。 2.根據(jù)以上谷蛋白亞基提取特征，本研究設(shè)計(jì)了從小麥(Triticum aeativurn L．)全麥粉中一次性同時(shí)完全提取HMW-GS和LMW-GS方法，這個(gè)方法綜合利用了90、23和-70℃的溫度條件和48h的較長(zhǎng)時(shí)間。本研究?jī)?yōu)化了通過(guò)SDS-PAGE分離HMW和LMW麥谷蛋白亞基的過(guò)程，同時(shí)也優(yōu)化了提取單體蛋白的溫度條件和提取時(shí)間(以取得最大的谷蛋

4、白亞基的提取量和純度)。 3.本研究用一種單體蛋白作為定量標(biāo)準(zhǔn)來(lái)定量亞基(單位μg)。這種方法比其他單獨(dú)定量HMW-GS或LMW-GS的方法有一些重要優(yōu)勢(shì)。首先，能夠得到HMW-GS和/或LMW-GS相對(duì)于全部谷蛋白或全麥粉的相對(duì)含量。其次，能夠得到凝膠上樣品和小麥單籽粒中單個(gè)HMW或LMW亞基的絕對(duì)含量，并且這種數(shù)值可以按高低排序。 4.用以上方法，檢測(cè)了180個(gè)小麥品種的各個(gè)麥谷蛋白亞基的質(zhì)量。根據(jù)亞基分子量的范圍，