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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:初步研究我國(guó)傳統(tǒng)中藥姜黃的主要成分姜黃素拮抗臨床常用化療藥物環(huán)磷酰胺對(duì)哺乳動(dòng)物遺傳物質(zhì)誘變作用及其量效關(guān)系,探討姜黃素的抗誘變作用的細(xì)胞遺傳學(xué)機(jī)制,確認(rèn)該物質(zhì)對(duì)哺乳動(dòng)物染色體的保護(hù)作用,為臨床腫瘤化療過(guò)程中應(yīng)用姜黃素抑制環(huán)磷酸胺的遺傳毒作用,減輕該藥的毒副反應(yīng)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
方法:采用小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)、小鼠染色體畸變實(shí)驗(yàn)和人外周血淋巴細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)、人外周血淋巴細(xì)胞染色體畸變實(shí)驗(yàn)等4個(gè)遺傳毒理學(xué)測(cè)試系統(tǒng),以
2、小鼠的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)和人外周血淋巴細(xì)胞的體外實(shí)驗(yàn)相結(jié)合,研究姜黃素對(duì)臨床常用化療藥物環(huán)磷酰胺(CPP)誘變性的抑制作用。在此實(shí)驗(yàn)中,姜黃素的小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)與姜黃素的人淋巴細(xì)胞體外實(shí)驗(yàn)均分5組:即陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、高劑量姜黃素與CPP合用組(簡(jiǎn)稱姜黃素高劑量組)、中劑量姜黃素與CPP合用組(簡(jiǎn)稱姜黃素中劑量組)、低劑量姜黃素與CPP合用組(簡(jiǎn)稱姜黃素低劑量組)。小鼠微核實(shí)驗(yàn)和染色體畸變實(shí)驗(yàn)各組動(dòng)物分別用生理鹽水或姜黃素連續(xù)灌胃7d后,腹腔注
3、射誘變劑,處死前4h各組動(dòng)物均腹腔注射秋水仙素液,使細(xì)胞分裂停留在中期。微核標(biāo)本用直接涂片法制片,
染色體標(biāo)本用滴片法制片。人外周血淋巴細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)和染色體畸變實(shí)驗(yàn)在無(wú)菌操作培養(yǎng)人外周血24h后,姜黃素各劑量組加入誘變劑以及不同劑量的姜黃素,空白組加入等量無(wú)菌生理鹽水,陽(yáng)性對(duì)照組加入相應(yīng)誘變劑及無(wú)菌生理鹽水,培養(yǎng)終止前4h在每個(gè)培養(yǎng)體系中加入秋水仙素液。培養(yǎng)72h后收獲細(xì)胞,采用氣干法制片。所有玻片標(biāo)本經(jīng)Giemsa染色后
4、,雙盲法閱片,在光學(xué)顯微鏡的油鏡下觀察并分別計(jì)數(shù)每張玻片中的間期細(xì)胞及中期分裂相,微核細(xì)胞及染色體畸變細(xì)胞,顯微照相記錄各組標(biāo)本。各劑量組間用方差分析,同組的微核率與染色體畸變率進(jìn)行直線相關(guān)性分析。
結(jié)果:
1.小鼠骨髓細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn):與空白組比較,陽(yáng)性組的微核率明顯高于空白組(p<0.01),說(shuō)明CPP有明顯的誘變作用。與CPP組比較,姜黃素低、中、高劑量組均有非常顯著差異(p<0.01);實(shí)驗(yàn)中,低劑量與中
5、劑量、中劑量與高劑量有非常顯著性差異(p<0.01),有明顯量效關(guān)系。
2.小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變實(shí)驗(yàn):與空白組比較,陽(yáng)性組的畸變率明顯高于空白組(p<0.01),說(shuō)明CPP有明顯的誘變作用。與CPP組比較,姜黃素高劑量組有非常顯著性差異(p<0.01);實(shí)驗(yàn)中,低劑量與高劑量、中劑量與高劑量有非常顯著性差異(p<0.01),而低劑量與中劑量無(wú)顯著差異,未表現(xiàn)出明顯量效關(guān)系。經(jīng)直線相關(guān)分析,小鼠MN率與CA率存在顯著正相關(guān)
6、關(guān)系(r=0.837,p<0.01),說(shuō)明微核的形成與染色體畸變、損傷有密切關(guān)系。
3.人體外周血淋巴細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn):與空白組比較, CPP組的畸變率明顯高于空白組(p<0.01),說(shuō)明CPP有明顯的誘變作用。與CPP組比較,姜黃素中劑量組、高劑量組有顯著性差異(p<0.05),經(jīng)方差分析,在實(shí)驗(yàn)中,低劑量與高劑量、低劑量與中劑量、中劑量與高劑量間均有顯著性差異(p<0.05),有明顯量效關(guān)系。
4.人體外周血
7、淋巴細(xì)胞染色體畸變實(shí)驗(yàn):與空白組比較,陽(yáng)性組的畸變率明顯高于空白組(p<0.01),說(shuō)明CPP有明顯的誘變作用。與CPP組比較,姜黃素中、高劑量組有顯著性差異(p<0.05);實(shí)驗(yàn)中,低劑量與中劑量、高劑量組有顯著性差異(p<0.05),而中劑量與高劑量無(wú)顯著性差異,未表現(xiàn)出明顯量效關(guān)系。經(jīng)直線相關(guān)分析,人外周血淋巴細(xì)胞MN率與CA率存在顯著正相關(guān)關(guān)系(r=0.906,p<0.01),說(shuō)明微核的形成與染色體畸變、損傷有密切關(guān)系。
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