胞漿型磷脂酶A-,2-調(diào)控ECV-304細(xì)胞釋放Leptin的作用研究.pdf

1、Leptin(瘦素或消脂素)，是一種廣泛存在于機(jī)體脂肪組織中調(diào)控體重平衡及能量代謝平衡的關(guān)鍵激素。近來的研究發(fā)現(xiàn)，Leptin與創(chuàng)傷感染過程及急性應(yīng)激狀態(tài)下機(jī)體發(fā)生的嚴(yán)重能量代謝失衡有著緊密的聯(lián)系，它可能作為一種新型的炎性分子參與了機(jī)體的炎癥反應(yīng)。但對(duì)于Leptin在炎癥反應(yīng)中是促進(jìn)機(jī)體損傷還是對(duì)機(jī)體有保護(hù)作用呢?目前仍沒有定論。cPLA2是炎性反應(yīng)中的關(guān)鍵酶，它可介導(dǎo)大量炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生，促進(jìn)炎癥發(fā)生，是炎性反應(yīng)中信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的“重量級(jí)

2、”分子。由于cPLA2在炎癥反應(yīng)中的關(guān)鍵作用，我們猜測：它可能參與介導(dǎo)細(xì)胞釋放Leptin的過程。驗(yàn)證這一假設(shè)將有助于明確Leptin與cPLA2的關(guān)系及Leptin在炎癥反應(yīng)中所發(fā)揮的作用。因此，本文重點(diǎn)探討cPLA2是否參與介導(dǎo)了細(xì)胞釋放Leptin的過程，并且通過觀察Leptin對(duì)細(xì)胞釋放促炎因子的影響進(jìn)一步探討Leptin的作用。 我們將從以下三個(gè)方面進(jìn)行探討，即：(1)激活cPLA2對(duì)ECV-304細(xì)胞釋放Leptin

3、的影響；(2)在蛋白水平及基因水平抑制cPLA2的活性及表達(dá)后細(xì)胞釋放Leptin的變化；(3)觀察Leptin對(duì)ECV-304細(xì)胞分泌IL-6、IL-8的影響，具體方法如下： 1.首先，分別利用LPS、PAF及A23187活化ECV-304細(xì)胞中cPLA2，觀察細(xì)胞釋放Leptin的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，LPS和PAF均可引起Leptin濃度的顯著下降(P＜0.05)，而A23187并未引起Leptin水平的明顯變化。提示：最大限度

4、的活化cPLA2可降低細(xì)胞釋放Leptin的濃度。 2.分別利用不同濃度的MEK1/2特異性抑制劑U0126、cPLA2特異性抑制劑AACOCF3及cPLA2反義寡核苷酸從不同角度抑制cPLA2的活性及表達(dá)，觀察cPLA2活性與細(xì)胞分泌Leptin的關(guān)系。結(jié)果顯示，U0126、AACOCF3及轉(zhuǎn)染反義寡核苷酸可濃度依賴性的抑制cPLA2的活化及表達(dá)，LPS誘導(dǎo)的ECV-304細(xì)胞釋放Leptin水平的下降隨cPLA2活性被抑制而

5、逐漸回升，兩者成負(fù)相關(guān)。提示：抑制cPLA2活化可促進(jìn)細(xì)胞釋放Leptin。 3.利用不同濃度的外源性Leptin作用于ECV-304細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)隨著Leptin濃度的增加，Leptin單獨(dú)刺激組的細(xì)胞分泌IL-6、IL-8的濃度較空白對(duì)照組具有降低的趨勢。提示Leptin對(duì)于細(xì)胞釋放IL-6、IL-8具有潛在的抑制作用。 我們得出結(jié)論：(1)cPLA2在ECV-304細(xì)胞釋放Leptin的過程中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。(2)