胞漿型磷脂酶A-,2-介導(dǎo)EGF和FBS誘導(dǎo)的Hela細(xì)胞增殖.pdf

1、在細(xì)胞增殖通路中，表皮生長因子(EGF)的作用通路已被廣泛研究。它通過自身受體EGFR-ras途徑向下游傳遞有絲分裂信號，通過激活絲裂原活化蛋白激酶家族(MAPKs)，調(diào)節(jié)增殖相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子(如c-myc，c-fos)促進(jìn)細(xì)胞增殖分化。其中，胞外信號調(diào)節(jié)激酶1/2(ERK1/2)是傳遞EGF促有絲分裂信號的關(guān)鍵酶。值得注意的是磷脂酶A2(PLA2)家族中重要一員胞漿型PLA2(cPLA2)可被ERK1/2磷酸化激活。在以往研究中已證實，

2、PLA2水解膜磷脂的產(chǎn)物花生四烯酸(AA)及其代謝產(chǎn)物除具有炎性介質(zhì)作用外，還參與調(diào)節(jié)多種細(xì)胞的生長增殖，表明了PLA2與細(xì)胞增殖存在一定關(guān)系。但cPLA2在細(xì)胞增殖的具體途徑中的確切作用卻仍不明確。 為進(jìn)一步探討cPLA2細(xì)胞增殖過程中的作用，我們通過改變cPLA2的活性或表達(dá)，觀察在EGF和FBS兩種不同的促增殖物質(zhì)的作用下，Hela細(xì)胞的增殖情況及其細(xì)胞周期的改變情況。具體方法如下： 1.首先，利用不同濃度的MEK

3、1/2特異性抑制劑U0126抑制ERK1/2，觀察U0126對EGF和FBS作用下Hela細(xì)胞活性的變化及細(xì)胞周期的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，EGF和FBS均可引起Hela細(xì)胞明顯增殖，且二者誘導(dǎo)增殖的效果無明顯差異；而U0126可以明顯抑制二者誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖，且呈劑量依賴性；同時它也能減少Hela細(xì)胞G2/M期比例，將細(xì)胞阻滯在S期；我們還發(fā)現(xiàn)EGF和FBS可促使Hela細(xì)胞中cPLA2活性明顯增加，EGF對cPLA2活性上調(diào)的效果略高于FBS

4、處理組；而U0126的加入可以將二者對cPLA2活性上調(diào)的作用抑制。其次，利用不同濃度的cPLA2特異性抑制劑AACOCF3抑制cPLA2活性，在EGF和FBS作用下，AACOCF3可以劑量依賴的抑制Hela細(xì)胞的增殖，減少G2/M期細(xì)胞比例；且cPLA2活性與Hela細(xì)胞增殖狀況呈正相關(guān)。 2.利用cPLA2反義寡核苷酸抑制cPLA2蛋白表達(dá)，通過Westernblot法檢測胞漿中cPLA2水平的變化，并觀察cPLA2水平與H