白眉蝮蛇蛇毒Gln49磷脂酶A-,2-的細胞毒性研究.pdf

1、長白山白眉蝮蛇(Agkistrodonblomhoffiiussurensis)蛇毒Gln49磷脂酶A2同源物，經(jīng)SDS-PAGE檢測為一條帶，分子量為16kDa左右。具有抗凝血活性、肌肉毒性，但缺乏磷脂酶A2活性。本文通過該蛋白質對不同細胞生長的影響以及細胞內蛋白表達的分析，表明其具有細胞毒性。 MTT方法檢測結果表明：Gln49-PLA2對MCF-7、Hela、ECV-304、K562和HL60五種細胞具有細胞毒性，且毒性作

2、用存在時間和劑量依賴性；對K562和MCF-7細胞的半數(shù)有效劑量(IC50)分別為13μmol/L和1.2μmol/L。在給藥濃度為半數(shù)有效劑量，作用8小時條件下，光學顯微鏡觀察到K562細胞出現(xiàn)細胞碎片，MCF-7細胞脫離培養(yǎng)瓶壁面，表明Gln49-PLA2能夠抑制兩種細胞的生長，并具有毒性作用。 LDH方法檢測結果表明：Gln49-PLA2引起K562和MCF-7細胞乳酸脫氫酶的釋放，改變了細胞膜的通透性。流式細胞儀檢測結果

3、表明：該蛋白終濃度達28μmol/L，K562細胞凋亡比率為21﹪，終濃度達5μmol/L，MCF-7細胞凋亡比率為22.6﹪；隨著蛋白用量增加，兩種細胞線粒體膜電位均下降，進一步表明Gln49-PLA2誘導兩種細胞發(fā)生凋亡；隨著該蛋白濃度的增加，K562細胞內Bcl-2蛋白表達無明顯變化，MCF-7細胞的Bcl-2蛋白的表達呈現(xiàn)下降趨勢，提示Gln49-PLA2在誘導K562細胞凋亡過程中，Bcl-2的調控作用不占重要地位。Caspa