磷脂酶C和磷脂酶D在核黃素誘導(dǎo)煙草懸浮細(xì)胞防衛(wèi)反應(yīng)中的作用.pdf

1、核黃素作為植物防衛(wèi)反應(yīng)的激發(fā)子，可增強(qiáng)植物對(duì)由真菌、卵菌、細(xì)菌、病毒等病害的抗性。但是，其防衛(wèi)機(jī)制并不清楚。磷脂酶C(phospholipasc C，PLC)信號(hào)和磷脂酶D(phospholipase D，PLD)信號(hào)途徑在動(dòng)植物防衛(wèi)反應(yīng)中起著重要作用。PLC的水解產(chǎn)物二酯酰甘油(diacylglycerol，DAG)和三磷酸肌醇(inositol 1，4，5-trisphosphate，IP3)，以及PLC和PLD的共同產(chǎn)物磷脂酸(p

2、hosphatidic acid，PA)。目前對(duì)于PLC信號(hào)途徑和PLD信號(hào)途徑是否參與了煙草懸浮細(xì)胞中核黃素誘導(dǎo)的防衛(wèi)反應(yīng)還缺乏系統(tǒng)研究。
　　 本文運(yùn)用藥理學(xué)方法研究煙草懸浮細(xì)胞，為了確定核黃素激發(fā)的防衛(wèi)反應(yīng)是否依賴(lài)于PLC和PLD途徑。通過(guò)采用生物化學(xué)、細(xì)胞化學(xué)、半定量RT-PCR(reverse transcriptasc-polymerase chain reaction，RT-PCR)、熒光定量PCR(Real-ti

3、me，PCR)和高效液相色譜(high performance liquid chromatography，HPLC)等技術(shù)測(cè)定了一系列防衛(wèi)反應(yīng)。所得結(jié)果如下：
　　 1、煙草懸浮細(xì)胞受核黃素誘導(dǎo)后NtPLC1表達(dá)量沒(méi)有明顯變化，但其它PLC和PLD基因的表達(dá)量均明顯增加。NtPLD(NtPLDα2，NtPLDα3，NtPLDβ1和NtPLDδ)基因的表達(dá)水平也表現(xiàn)出差異。
　　 2、為了闡明PLC和PLD是否參與了核黃

4、素誘導(dǎo)的煙草懸浮細(xì)胞的過(guò)氧化氫(H2O2)的產(chǎn)生，用PLC的特異性抑制劑U73122和PLD的抑制劑1-butanol提前處理核黃素誘導(dǎo)的細(xì)胞，測(cè)定細(xì)胞過(guò)氧化氫被抑制情況。結(jié)果表明U73122(10μmol/L)和1-butanol(0.1％，v/v)對(duì)核黃素誘導(dǎo)的過(guò)氧化氫產(chǎn)生的抑制率分別為79.5％和62.9％。但是U73343(U73122的類(lèi)似物)和tert-butanol(1-butanol的類(lèi)似物)沒(méi)有作用。這些結(jié)果表明PLC

5、和PLD途徑都參與了核黃素誘導(dǎo)的煙草懸浮細(xì)胞的過(guò)氧化氫的產(chǎn)生。另外，核黃素還能誘導(dǎo)一氧化氮(nitric oxide，NO)的生成。
　　 3、提前加入PLC抑制劑(U73122)和PLD的抑制劑(1-butanol)處理核黃素誘導(dǎo)的煙草懸浮細(xì)胞后，3種防衛(wèi)基因PR(pathogenesis-related)-1a、PR-16及PAL等的表達(dá)受到不同程度的抑制。
　　 4、PLC和PLD抑制對(duì)核黃素誘導(dǎo)的scopolet