類細(xì)菌素生產(chǎn)菌LL18-4的固定化培養(yǎng)研究.pdf

1、從四川某酒廠采集的酒糟和酒糟浸出液為樣本中篩選得到一株對(duì)多種革蘭氏陽(yáng)性指示菌、革蘭氏陰性指示菌及部分霉菌具有廣譜抗菌活性的類細(xì)菌素產(chǎn)生菌，菌株編號(hào)LL18-4。經(jīng)形態(tài)觀察及生理生化實(shí)驗(yàn)和16S rDNA PCR擴(kuò)增和序列測(cè)定，鑒定該菌為枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)。 由于游離發(fā)酵等傳統(tǒng)的微生物發(fā)酵法存在著局限性，近20年來固定化技術(shù)已經(jīng)得到廣泛的關(guān)注，固定化方法具有菌體密度高，反應(yīng)快，抗干擾能力強(qiáng)，可縮短發(fā)酵

2、周期，提高轉(zhuǎn)化率，節(jié)省人力、物力以及產(chǎn)物分離方便，菌體可重復(fù)連續(xù)使用的優(yōu)點(diǎn)。本文以海藻酸鈣為材料，固定枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)LL18-4，研究不同的固定化小球制備對(duì)類細(xì)菌素效價(jià)的影響。結(jié)果表明，利用3％海藻酸鈉在2％CaCl<,2>條件下，得到固定化細(xì)胞顆粒的類細(xì)菌素效價(jià)和穩(wěn)定性較好，可維持216h無破裂。 通過單因素法對(duì)其固定化菌進(jìn)行發(fā)酵條件的研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)培養(yǎng)溫度為37℃，pH值6.5，接種量1％，培

3、養(yǎng)時(shí)間72h靜止培養(yǎng)后，固定菌所產(chǎn)類細(xì)菌素的抑菌活性高，最高效價(jià)能達(dá)到334.2U/mL。 對(duì)固定化枯草芽孢桿菌LL18-4進(jìn)行半連續(xù)培養(yǎng)的研究，結(jié)果表明通過216h三批次循環(huán)的半連續(xù)培養(yǎng)，固定菌活性能維持在260.9 U/mL 以上。對(duì)該類細(xì)菌素生物學(xué)特性進(jìn)行初步研究，用蛋白酶K、溶菌酶處理發(fā)酵上清液后，該類細(xì)菌素對(duì)蛋白酶K部分敏感，對(duì)溶菌酶不敏感；經(jīng)高溫處理一定時(shí)間后抑菌活性保持較完整，證明其熱穩(wěn)定性較高；抑菌活性pH范圍是