乳酸菌素產(chǎn)生菌的分離鑒定及培養(yǎng)條件的初步研究.pdf

1、乳酸菌是一類(lèi)能利用可發(fā)酵的糖產(chǎn)生大量乳酸的細(xì)菌的通稱(chēng)。長(zhǎng)期以來(lái)，乳酸菌廣泛應(yīng)用于乳制品、蔬菜及肉制品等發(fā)酵食品的生產(chǎn)中。在其生長(zhǎng)代謝中，乳酸菌能產(chǎn)生具有抑菌或殺菌效果的細(xì)菌素，不僅可以改善腸道生態(tài)，還可以用于食品與飼料的防腐，細(xì)菌素在抑制各種食物腐敗菌方面的重要作用已愈來(lái)愈多的受到人們的關(guān)注。 本實(shí)驗(yàn)對(duì)乳酸菌素產(chǎn)生菌進(jìn)行分離，從辣白菜中分離得到四個(gè)理想菌株Ⅱ4、Ⅱ11、Ⅱ13、Ⅱ32。利用高效液相色譜檢測(cè)其發(fā)酵液，初步確定4菌株

2、均為乳酸菌，其中Ⅱ32菌株產(chǎn)乳酸最多、對(duì)各指示菌的抑制作用最顯著，只對(duì)該菌株作進(jìn)一步的研究。Ⅱ32菌株在MRS培養(yǎng)基上可以生長(zhǎng)，最適生長(zhǎng)溫度為28℃，革蘭氏染色呈陽(yáng)性，無(wú)芽孢。過(guò)氧化氫酶、淀粉水解、硫化氫產(chǎn)生、乙酰甲基甲醇試驗(yàn)(V-P試驗(yàn))、石蕊牛奶胨化、明膠液化試驗(yàn)為陰性；葡萄糖、葡萄糖酸鹽、石蕊牛奶產(chǎn)酸、石蕊牛奶還原為陽(yáng)性。 通過(guò)API生化反應(yīng)試驗(yàn)、16SrDNA測(cè)序可進(jìn)一步確定該菌株是L.aplantarum或L.para

3、plantarum。最終通過(guò)對(duì)recA-gene的PCR產(chǎn)物檢測(cè)，鑒定菌株Ⅱ32為L(zhǎng)actobacillusparaplantarum(類(lèi)植物乳桿菌)。牛津杯抑菌試驗(yàn)顯示，該菌株的發(fā)酵液不僅對(duì)多數(shù)G+細(xì)菌的生長(zhǎng)有較強(qiáng)的抑制作用，而且對(duì)大腸桿菌、沙門(mén)氏菌等G-細(xì)菌的生長(zhǎng)也具有明顯的抑制作用，但對(duì)真菌沒(méi)有活性。 另外，本實(shí)驗(yàn)還對(duì)Ⅱ32的發(fā)酵條件進(jìn)行研究，實(shí)驗(yàn)采用的是單因子篩選法：即保持其他培養(yǎng)條件不變，只改變其中一個(gè)條件的方法，確定

4、出最適合生長(zhǎng)、抑菌活性最大的培養(yǎng)基組分和培養(yǎng)條件。 ①確定Ⅱ32最適合發(fā)酵的培養(yǎng)基： 通過(guò)實(shí)驗(yàn)表明，亞苯基乙醇蔗糖液體培養(yǎng)基、改進(jìn)的乳桿菌選擇培養(yǎng)基、M-腸球菌液體培養(yǎng)基、MRS液體培養(yǎng)基等四種培養(yǎng)基中MRS液體培養(yǎng)基最適合于Ⅱ32的生長(zhǎng)且抑菌活性最大。 ②確定出最適合Ⅱ32的培養(yǎng)條件： 通過(guò)實(shí)驗(yàn)表明最佳碳源為麥芽糖；氮源為酵母粉，濃度為2.0﹪；最佳金屬離子為Ni2+；最適的pH值范圍為5.5～7.0，