大豆三種不同遺傳轉(zhuǎn)化方法的優(yōu)化研究.pdf

1、大豆是我國重要的農(nóng)作物之一，在工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中占有重要地位，現(xiàn)階段我國大豆供給將近50％依賴于進(jìn)口。影響我國大豆種植的一個(gè)重要原因就是草害，抗除草劑基因的發(fā)現(xiàn)和基因工程技術(shù)為解決這一問題提供了新的思路。由于多種原因，比如大豆再生困難，大豆遺傳轉(zhuǎn)化研究緩慢。
　　本文首先以大豆胚尖為外植體，對(duì)胚尖不定芽再生過程中草甘膦的最適耐受濃度進(jìn)行了確定，實(shí)驗(yàn)表明在不定芽伸長階段，吉育91合適的篩選濃度為15 mg/L，黑農(nóng)37和合豐35為7.5

2、mg/L，黑農(nóng)35和黑農(nóng)44為5.0 mg/L，生根階段以1.5 mg/L作為最適篩選濃度。在農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化下，研究激素濃度對(duì)胚尖不定芽的影響，結(jié)果表明不同大豆基因型胚尖伸長的最適培養(yǎng)基激素濃度不同，黑農(nóng)37適于于0.05 mg/L6-BA培養(yǎng)基，黑農(nóng)44適于于僅含有0.2 mg/L IBA的培養(yǎng)基，合豐35適合于0.05 mg/L6-BA+0.1mg/LIBA激素組合。研究發(fā)現(xiàn)，適當(dāng)?shù)某暡ㄌ幚韺?duì)胚尖不定芽的再生無顯著影響。利用

3、該遺傳轉(zhuǎn)化方法，最終獲得T0代PCR陽性植株15株，T1代PCR陽性植株16株，T2代陽性植株9株。
　　其次，研究了大豆未成熟子葉的體細(xì)胞胚胎發(fā)生受接種方式及光照的影響，結(jié)果表明各基因型的體細(xì)胞胚胎的發(fā)生均受接種方式影響，合豐25、吉林35和吉育91以近軸面向上的方式培養(yǎng)的體細(xì)胞胚胎發(fā)生率顯著高于近軸面向下的接種方式；同時(shí)各基因型的胚胎發(fā)生對(duì)光照要求各不同，吉育91與合豐25體細(xì)胞胚胎的發(fā)生更適合于強(qiáng)光照，黑農(nóng)44在黑暗下利于胚

4、胎發(fā)生，吉林35未成熟子葉體細(xì)胞胚胎發(fā)生對(duì)光照不敏感。對(duì)基因槍遺傳轉(zhuǎn)化過程中，高滲劑對(duì)大豆體細(xì)胞胚胎發(fā)生的影響的研究發(fā)現(xiàn)，不同的基因型受不同高滲劑種類處理，胚胎發(fā)生率有顯著不同，黑農(nóng)44、合豐25較適合使用0.4M甘露醇處理，泗豆4號(hào)更適合于0.2M甘露醇+0.2M山梨醇的混合處理方式，黑農(nóng)40適合用0.4M山梨醇或0.2M甘露醇+0.2M山梨醇。經(jīng)該方式遺傳轉(zhuǎn)化后，獲得PCR陽性植株12株。
　　最后，本論文嘗試了生長點(diǎn)微創(chuàng)傷遺