農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大豆遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、東北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大豆遺傳轉(zhuǎn)化研究姓名：劉昭軍申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：作物遺傳育種指導(dǎo)教師：楊慶凱2001.5.1劉昭軍 英 文 摘 井英文摘要S t u d i e s o n T r a n s f o r m a t i o n o f S o y b e a n C o t y l e d o n a r y N o d e s b y A g r o b a c t e r i u m t u

2、 m e f a c i e n sAb s t r a c tA g r o b a c t e r i u m t u m e f a c i e n - m e d i a t e d s o y b e a n c o t y l e d o n a r y n o d e t r a n s f o r m a t i o n s y s t e mw a s o p t i m i z a t e d , a

3、 c c o r d i n g t o t h e c h a r a c t e r i s t i c o f A . . t u m e f a c i e n - m e d i a t e d t r a n s f o r m a t i o na n d s o y b e a n c o t y l e d o n a r y n o d e r e g e n e r a t i o n s

4、 y s t e m . B a c i l l u s t h u r i n g i e n s i s c r y I A g e n e w a s i n t r o d u c e d i n t o s o y b e a n s u c c e s s f u l l y . T r a n s f o r m e d p l a n t s w e r e e x a m i n e d b

5、y P C R a n d P C R -S o u t h e r n r e a c t i o n , a n d 4 o f t h e p l a n t s g i v e p o s i t i v e r e a c t i o n . T h e s e r e s u l t s s h o w t h a t t h e B tg e n e h a s i n t e g

6、a t e d i n t o r e c e i v e r ' s g e n o m e .O p t i m i z a t i o n o f s o y b e a n c o t y l e d o n a r y n o d e r e g e n e r a t i o n :M M S m e d i u m i s o b v i o u s l y b e t t e r t

7、h a n B S B A a n d M S m e d i u m i n i n c r e a s i n g a d v e n t i t i o u sb u d s . T h e r e s u l t s i n d i c a t e d t h a t B A g r e a t l y i n f l u e n c e t h e p r o d u c t i o n o

8、f a d v e n t i t i o u s b u d s b yg e r m i n a t i n g e x p e r i m e n t o f t h r e e g e m i n a t i n g m e d i a , B 5 B A . B 5 a n d A g a r . T h e s u i t a b l e c o n c e n t r a t i o n s o

9、 f B A . N A A a n d p r o l i n e i n M M S m e d i u m a r e 2 m g / I 、 0 . 0 2 m g / l . 2 創(chuàng) !r e s p e c t i v e l y .. T h e n u m b e r o f c o t y l e d o n i n f l u e n c e s p r o d u c t i o n

10、 o f a d v e n t i t i o u s b u d s , a n d t h e s u i t a b l en u m b e r o f c o t y l e d o n i s h a l f .T h e f a c t o r s i n f l u e n c i n g A . t u n w f a c l e r t - m e d i a t e d s o y b

11、e a n t r a n s f o r m a t i o n w e r es t u d i e d w i t h t h e s e c t i o n o f s o 沙c a n h y p o c o t y l f r o m 7 - d a y - o l d s e e d l i n g s a s e z p l a n t s a n dr e s i s t a n t c

12、a l l u s a s t a r g e t , T h e r e s u l t s i n d i c a t e :P r e c u l t u r e o f e x p l a n t s o n h y p e r t o n i c m e d i u m b e f o r e i n f e c t i o n o f A t u m e f a c i e n c a n r

13、 a i s et h e t r a n s f o r m a t i o n f r e q u e c y o f t h e s e c t i o n o f s o y b e a n h y p o c o t y l . T h e o p t i m i u m d u r a t i o n o fp r e c u l t u r e i s I d a y .B o t h t

14、 h e c o n c e n t r a t i o n o f a c e t o s y i n g o n e ( A S ) a n d P H v a l u e a t s t a g e s o f i n f e c t i o n a n d c o -c u l t u r e i n f l u e n c e t h e t r a n s f o r m a t i o n

15、f r e q u e n c y o f s o y b e a n , T h e s u i t a b l e P H v a l u e i s b e t w e n5 . 4 a n d 5 . 6 , w h e n i t e x c e e d s 5 . g , t h e t r a n s f o r m a t i o n f r e q u e n c y d e c r e

16、a s e s o b v i o u s l y , T h es u i t a b l e A S c o n c e n t r a t i o n 1 0 0 l i M .S o n i c a t i o n o f e x p l a n t s c a n g r e a t l y i n c r e a s e t h e f r e q u e n c y o f g u s g e

17、 n e e x p r e s s i o n a n dt r a n s f o r m a t i o n a f t e r i t i n f e c t e d b y A t u m e f a c l e n s , a n d t h e s u i t a b l e t r e a t m e n t d u r a t i o n i s 6 0s e c o n d s .T h

18、e a g e o f e x p l a n t i n f l u e n c e s t h e t r a n s f o r m a t i o n f r e q u e n c y e x p l a n t i s 7 d a y s .T h e b e s t a g e o f:L i u Z h a o j u n M a j o r : C r o p G e n e t i c