華佗豆提取物抗瘢痕的實驗研究.pdf

1、目的：通過對華佗豆提取物體外抗瘢痕的細胞實驗和動物實驗，研究其對小鼠成纖維細胞（NIH3T3）和人增生瘢痕成纖維細胞（HKF）增殖的影響及對兔耳增生瘢痕的防治作用，評價華佗豆提取物的抗瘢痕作用。為進一步開發(fā)華佗豆和研制有效的外用抗皮膚瘢痕藥物提供理論和實驗依據(jù)。
　　方法：1、采用系統(tǒng)溶劑提取法對華佗豆進行提取。2、采用MTT法體外測定華佗豆提取物對小鼠成纖維細胞和人增生瘢痕成纖維細胞作用的影響。3、以一次給藥和多次給藥的方法，將

2、華佗豆70％醇提取物制成的凝膠劑及凝膠基質(zhì)分別外涂于家兔背部去毛區(qū)的完整皮膚和破損皮膚，觀察其產(chǎn)生家兔皮膚刺激性反應(yīng)。4、采用華佗豆70%醇提取物自制的凝膠劑對實驗家兔進行增生瘢痕的預(yù)防和治療，預(yù)防組于造模當天用藥，術(shù)后30天耳部瘢痕取材，治療組于術(shù)后28天用藥，術(shù)后60天將動物處死，耳部瘢痕取材，組織均用10%甲醛固定，石蠟包埋，切片，然后進行HE染色及VG染色，大體觀察和光鏡觀察瘢痕區(qū)形態(tài)學(xué)的改變，檢測瘢痕組織的增生指數(shù)(HI)、成

3、纖維細胞數(shù)密度(NA)及膠原纖維面積密度(AA)。
　　結(jié)果：1、本實驗采用系統(tǒng)溶劑提取法，加熱回流提取分別得到水提物、70%醇提物和95%醇提物3個提取物。2、華佗豆3種提取物對小鼠成纖維細胞的生長均有不同程度的促進作用，而對人增生瘢痕成纖維細胞的增殖有不同程度的抑制作用，且抑制率呈時間依賴性，兩者實驗結(jié)果顯示70%醇提物對小鼠成纖維細胞促進生長的作用效果最好，且對人增生瘢痕成纖維細胞的抑制作用最強。3、華佗豆凝膠劑對家兔完整皮

4、膚一次用藥和多次用藥的平均反應(yīng)分值均<0.5分，表明其對家兔正常皮膚無刺激性；一次給藥對家兔破損皮膚在用藥后1h平均反應(yīng)分值為0.67分>0.5分，但<2.0分，表明其對家兔破損皮膚有輕度刺激性，但在用藥后24h后刺激性消失。多次給藥對家兔破損皮膚，在末次用藥后1h平均反應(yīng)分值為0.33分<0.5分，表明華佗豆凝膠劑對家兔破損皮膚無刺激性。4、對各組兔耳瘢痕標本進行觀察和分析：（1）大體觀察：不處理組及基質(zhì)組：瘢痕明顯凸起皮緣，且凹凸不

5、平，質(zhì)地較周圍組織硬，色紅。實驗組：瘢痕略隆起于皮膚，瘢痕組織較平坦，柔軟，質(zhì)地基本同周圍組織，但局部稍硬，小部分地區(qū)色略紅。（2）光鏡下觀察：不處理組、基質(zhì)對照組瘢痕均明顯高于各自周圍正常組織，成纖維細胞數(shù)目多且密集，膠原纖維排列紊亂；實驗組：瘢痕稍高于周圍正常組織，膠原纖維較稀疏，排列較整齊，大部分呈束狀。（3）實驗組的增生指數(shù)HI、成纖維細胞數(shù)密度NA及膠原纖維面積密度 AA均小于不處理組和基質(zhì)對照組（p<0.01或p<0.05）