復方黃芪提取物抗肝癌的作用機制研究.pdf

1、目的：探討黃芪提取物(CAE)抗肝癌的作用機制。 方法：利用MTT方法建立小牛血清(NBS)、轉化生長因子-β<,1>(TGF-β<,1>)體外刺激HepG2細胞增殖模型，研究CEA(5，10，20，40，80 mg/L)五個劑量對NBS、TGF-β<,1>誘導的HepG2細胞增殖的影響；采用免疫沉淀和Western-blot方法檢測CAE對TGF-β<,1>誘導的HepG2細胞內Smad2C磷酸化的影響；Westem-blot

2、方法檢測3種MAPK抑制因子對TGF-β<,1>誘導的Smad2C、Smad2L、Smad3C、Smad3L磷酸化的影響；采用浸潤小室鏡下計數(shù)細胞的方法，檢測CAE(40 mg/L)對TGF-β<,1>誘導的HepG2細胞移行的影響。 結果：1．TGF-β<,1>(9pM·L<,-1>)、12.5％NBS作用0.5、1 h時無明顯促進HepG2細胞增殖作用，但作用2，4，8，16，24 h均明顯促進HepG2細胞增殖，CAE(5

3、～80 mg/L)呈濃度依賴型地抑制HepG2細胞增殖。2．CAE(40 mg/L)明顯抑制TGF-β<,1>(200 pM·L<'-1>，12h)誘導的HepG2細胞移行。3．TGF-β<,1>(9 pM·L<'-1>)作用1 h，明顯促進Smad2C、Smad2L、Smad3C、Smad3L磷酸化，CAE高中低三個劑量呈濃度依賴性地抑制由TGF-β<,1>誘導的Smad2C磷酸化。4．C-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制因子(1，3

4、，10μM/L)呈濃度依賴性地抑制Samd2C、Smad3L的磷酸化，JNK抑制因子(1，3，10 μM/L)有抑制Smad3C磷酸化的趨勢，對Smad2L磷酸化無明顯影響；p38抑制因子(1，3，10 μM/L)呈濃度依賴性地抑制Smad2C、Smad3L磷酸化，p38抑制因子(1，3，10 μM/L)有抑制Smad3C磷酸化的趨勢，對Smad2L磷酸化無明顯影響；細胞外信號調節(jié)激酶(ERK)抑制因子(1，3，10 μM．L<'-1>

5、)有抑制Smad2L磷酸化的趨勢；對Smad2C、Smad3L、Smad3C磷酸化無明顯影響。 結論：1．CAE可抑制HepG2細胞增殖與移行，提示，CAE可能具有抑制肝癌細胞生長與浸潤的作用；2．CAE高、中、低三個劑量可呈濃度依賴性地抑制由TGF-β<,1>誘導的Smad2C磷酸化，提示，CAE可能經由TGF-β/Smad信號轉導通路從而發(fā)揮抗肝癌的作用；3．JNK的抑制因子和p38的抑制因子明顯抑制TGF-β<,1>誘導的