ε-聚賴氨酸產(chǎn)生菌篩選及其生物活性研究.pdf

1、ε-聚賴氨酸(ε-PL)是一種均聚氨基酸，是目前一種新型生物防腐劑，它與傳統(tǒng)的化學防腐劑相比，具有安全性高、抑菌譜廣、熱穩(wěn)定性強等優(yōu)良特性。其應用領域也在不斷擴大，在生產(chǎn)可生物降解的生物材料、某些藥物的包裝物制作，靶向藥物載體及醫(yī)藥研究等方面均有重要用途。本課題立足從長白山區(qū)的林下土壤中篩選到一株產(chǎn)ε-聚賴氨酸的菌株，對其進行菌種鑒定，優(yōu)化其發(fā)酵條件，對發(fā)酵產(chǎn)物ε-PL進行分離純化，并研究其抑菌特性及抑菌機理，通過質(zhì)粒消除的方法來初步探

2、索菌株合成ε-PL的生物合成途徑。 本項研究從長白山區(qū)林下土壤中篩選到一株產(chǎn)ε-聚賴氨酸的菌株，通過Itzhaki方法測定ε-PL的含量及抑菌實驗最終確定菌株110-6就是產(chǎn)具有生物活性的ε-PL菌株。把菌株110-6作為出發(fā)菌株，對其進行菌種鑒定和分類。根據(jù)菌株110-6的生理生化特征，鑒定其屬于鏈霉菌屬(Streptomyces)。對菌株110-6的16SrDNA基因序列進行Blast同源序列分析并與11株鏈霉菌進行系統(tǒng)發(fā)育

3、分析，結果表明菌株110-6與白色鏈霉菌(Streptomyces albus)屬于同一屬菌，我們將其命名為白色鏈霉菌110-6(Streptomyces albus110～6)。 對實驗菌株進行培養(yǎng)條件優(yōu)化，采用單因素和正交實驗結合的方法，最終確定了最佳培養(yǎng)基配方為：葡萄糖5％，硫酸銨15％，酵母膏1％，MgSO<,4>0.125％，K<,2>HPO<,4>0.15％，KH<,2>PO<,4>0.15％。最佳產(chǎn)ε-PL發(fā)酵條件

4、為：裝液量為50ml/500ml三角瓶，初始pH值為6.0，接種量為7％，發(fā)酵溫度為30℃。用SPSS軟件分析方差，得到各因素影響發(fā)酵產(chǎn)物產(chǎn)量的顯著程度依次為葡萄糖>硫酸銨：酵母膏>MgSO<,4>＞K<,2>HPO<,4>＞ZnSO<,4>/FeSO<,4>＞KH<,2>PO<,4>。 采用陽離子交換層析的方法對菌株S.a 110-6發(fā)酵產(chǎn)物ε-PL進行分離純化，對提純的ε-PL濃縮液進行氨基酸組分的分析，結果表明活性物質(zhì)就是