慢性丙型肝炎疫苗的初步研究及肝硬化的實驗治療.pdf

1、慢性病毒性肝炎和肝硬化是威脅人類健康的兩種最主要的肝臟疾病。由于乙型肝炎疫苗的發(fā)明和普及應用，丙型肝炎在慢性病毒性肝炎的發(fā)病中發(fā)揮越來越重要的作用。因此，丙型肝炎的預防和肝硬化的治療成為肝病學者面臨的兩個最重要的任務。本文對這兩個重要問題進行了初步的探討。第一部分：雙鏈RNA和HCVNS3蛋白免疫小鼠可增強細胞免疫反應背景和目的：雙鏈RNA是病毒復制過程中細胞內(nèi)產(chǎn)生的一種特殊的RNA分子，它可以通過To11蛋白樣受體3通道來誘導機體抗病

2、毒免疫。HCVNS3蛋白與HCV的免疫逃逸有關(guān)，也是抗HCV感染免疫的主要目標之一。方法：小鼠用NS3重組蛋白(rNS3)和poly(I：C)混合并與MontanideISA720(M720)乳化后免疫小鼠。小鼠脾淋巴細胞細胞因子的產(chǎn)生用ELISPOT方法檢測，CD4+IFN-γ+T輔助細胞和CD8+IFN-γ+細胞毒T淋巴細胞(CTL)用流式細胞儀進行檢測。抗-HCVNS3抗體效價及IgG2a乖IgG1的含量用ELISA方法檢測。結(jié)果

3、：細胞因子產(chǎn)生情況的分析表明，用rNS3與poly(I：C)和M720復合疫苗可以誘導更多的IFN-γ分泌細胞，數(shù)倍于IL-4分泌細胞，證明該疫苗可以誘導Th1主導的免疫反應。而不加poly(I：C)的rNS3與M720復合疫苗可以誘導Th2主導的免疫反應。rNS3與poly(I：C)和M720復合疫苗誘導的IFN-γ分泌細胞數(shù)量顯著多于僅用rNS3、rNS3與M720乳化或rNS3與poly(I：C)混合疫苗免疫者，而與用rNS3與C

4、pG和M720復合疫苗誘導的IFN-γ分泌細胞數(shù)量相當。另外，rNS3與poly(I：C)和M720復合疫苗誘導的CD8+IFN-γ+T細胞百分比與rNS3與CpG和M720復合疫苗所誘導的相當，這種CD8+T細胞免疫反應可以持續(xù)7個月以上。結(jié)論：Poly(I：C)與rNS3和M720復合疫苗可通過交叉啟動誘導強而持久的CTL反應和Th1主導的免疫反應。本研究提出了一種深具潛力的疫苗，它可以在小鼠實驗中誘導增強的抗HCV細胞免疫，有發(fā)展

5、為臨床應用的HCV疫苗的潛力。 第二部分：細菌膠原酶門靜脈灌注逆轉(zhuǎn)兔實驗性肝硬化 背景和目標：肝硬化的消退與肝內(nèi)膠原降解酶活性升高有關(guān)。本文試圖研究通過門靜脈補充膠原酶是否可延緩肝硬化的形成，并逆轉(zhuǎn)已形成的肝硬化。 方法：實驗使用35只雄性新西蘭白兔，然而，由于門靜脈插管手術(shù)及以后的感染導致的死亡，僅有15只兔(43％)完成實驗。4只兔作為正常對照(I組)給予CCl4皮下注射12周，然后行門靜脈生理鹽水灌注12周

6、。4只兔先皮下注射CCl46周，此后6周給予膠原酶門靜脈灌注，6mg每周兩次，同時也給予CCl4皮下注射(Ⅱ組)。4只兔先皮下注射CCl412周，再行膠原酶門靜脈灌注12周(Ⅲ組)，另3只兔作為對照組，先皮下注射CCl412周，再行生理鹽水門靜脈灌注12周(Ⅳ組)。結(jié)果：經(jīng)過12周的CCl4注射，用膠原酶治療的Ⅱ組肝羥脯氨酸含量(361.1±106.6μg/g)顯著低于尚未應用膠原酶的Ⅲ+Ⅳ組(589.0±162.9μg/g；P＜0.0

7、5)。應用膠原酶灌注12周后，Ⅲ組動物肝羥脯氨酸含量(177.5±35.6μg/g)顯著低于用生理鹽水灌注的對照組(Ⅳ組)(446.3±150.1μg/g；P＜0.01)。肝臟組織學檢查也顯示經(jīng)膠原酶治療后肝硬化完全消退。肝、腎、肺、腦、心組織學檢查未發(fā)現(xiàn)膠原酶的毒性反應。有2只兔發(fā)生過敏反應，一只死亡。結(jié)論：本研究提供了“原則性證據(jù)”表明門靜脈灌注膠原酶可以延緩兔CCl4模型肝硬化的形成，并可逆轉(zhuǎn)已形成的肝硬化。目前臨床應用條件尚不成