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1、目的:槲皮素甲基化改造得到的五甲基槲皮素(PMQ),對心肌缺血再灌注損傷具有保護作用。本實驗采用原代SD大鼠乳鼠心肌細(xì)胞,建立心肌缺氧/復(fù)氧(anoxia/re-oxygenation,A/R)損傷模型,探討五甲基槲皮素預(yù)處理對大鼠心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的保護作用及其對線粒體功能的影響。
方法:培養(yǎng)原代SD大鼠乳鼠心肌細(xì)胞,隨機分為8組,每組實驗重復(fù)3次:(1)正常對照組(Cont);(2)Cont+DMSO組;(3)缺氧/復(fù)
2、氧組(A/R);(4)A/R+DMSO組;(5)缺氧預(yù)適應(yīng)的延遲相組(DPC);(6)10μmol/L PMQ+A/R組;(7)30μmol/L PMQ+A/R組;(8)100μmol/L PMQ+A/R組。用MTT比色法檢測細(xì)胞存活率,Beckman生化自動分析儀檢測培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(LDH)活性,酶聯(lián)免疫檢測儀測定各組脂質(zhì)過氧化物丙二醛(MDA)含量、抗氧化物酶(SOD)活性、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的活性;流式細(xì)胞法檢
3、測線粒體膜電位(Δψm)以及細(xì)胞凋亡情況、線粒體腫脹法檢測各組心肌細(xì)胞線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔(mPTP)開放情況。
結(jié)果:與Cont組相比,A/R組的各項指標(biāo)均顯示細(xì)胞凋亡增加(P<0.01),說明A/R模型構(gòu)建成功;與A/R組相比,DPC組的各項指標(biāo)均顯示細(xì)胞凋亡減少,說明DPC模型構(gòu)建成功(P<0.01);與A/R組相比,不同劑量PMQ(10,30,100μmol/L)預(yù)處理24 h組,其呈現(xiàn)劑量依賴性的使LDH活性降低、細(xì)胞
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