硫化氫后處理對大鼠缺氧-復(fù)氧心肌細(xì)胞的保護作用及機制研究.pdf

1、目的：通過建立成年SD大鼠心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷模型，探討硫化氫（H2S，以NaHS為供體)后處理對缺氧/復(fù)氧損傷成年大鼠心肌細(xì)胞的影響，以評價其心肌保護作用及其可能的機制。
　　方法：
　　1.應(yīng)用Langendorff離體心臟灌注裝置分離大鼠心肌細(xì)胞，建立心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷模型，將分離的同批次的心肌細(xì)胞培養(yǎng)20h后，隨機分為：正常組（N組）、缺氧/復(fù)氧組（IR組）、缺氧后處理組（IPTC組）、硫化氫后處理（S組）。N

2、組持續(xù)培養(yǎng)120 min；IR組缺氧60min，復(fù)氧60 min；IPTC組缺氧60 min后即刻復(fù)氧3 min/缺氧3 min，重復(fù)3次后復(fù)氧60 min；S組復(fù)氧前用含終濃度為10μmol/L NaHS的培養(yǎng)液作用2 min，其余操作與IR組相同；采用激光共聚焦顯微鏡，檢測各組心肌細(xì)胞內(nèi)F-肌動蛋白/G-肌動蛋白（F-actin/G-actin）熒光強度的比值以及 Western-blot技術(shù)檢測各組心肌細(xì)胞 p38MAPK磷酸化（

3、p-p38MAPK）水平。
　　2.同方法1建立心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷模型，將分離的同批次的心肌細(xì)胞培養(yǎng)20h后，隨機分為：正常組（N組）、缺氧/復(fù)氧組（IR組）、缺氧后處理組（IPTC組）、硫化氫后處理組（S組）、細(xì)胞松弛素D+正常組（C+N組）、細(xì)胞松弛素D+缺氧/復(fù)氧組(C+IR組)、細(xì)胞松弛素D+缺氧后處理組（C+IPTC組）和細(xì)胞松弛素D+硫化氫后處理組(C+S組），共8組。加入細(xì)胞松弛素D(CyD)的四組分別于缺氧前加

4、入CyD1μg/ml處理60 min，繼而處理方式同方法1。采用激光共聚焦顯微鏡，檢測各組心肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+、pH值的熒光強度。
　　結(jié)果：
　　1.F-actin/G-actin熒光強度比值和p-p38MAPK水平的變化：
　　F-actin/G-actin熒光強度比值：與N組比較，IR組、IPTC組和S組熒光強度比值均升高(P<0.05)；與IR組比較，IPTC組和S組均升高(P<0.05)；S組高于IPTC組（P

5、<0.05）。
　　p-p38MAPK水平：IR組磷酸化水平高于N組、IPTC組和S組(P<0.05)；S組、IPTC組、N組組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義
　　2.細(xì)胞松弛素D（CyD）對細(xì)胞內(nèi)Ca2+、pH值熒光強度的影響
　　細(xì)胞內(nèi)Ca2+熒光強度：（1）IR組Ca2+熒光強度高于N組、IPTC組和S組(P<0.05)；S組、IPTC組與N組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；（2）加入CyD后的各組熒光強度與所對應(yīng)

6、的N組、IR組、IPTC組和S組比較均顯著升高，且均高于N組(P<0.05)；（3）加入CyD四組與N組鈣離子熒光強度差值分別用：N-N，IR-N，IPTC-N以及S-N表示，IR-N，IPTC-N和S-N大于N-N(P<0.05)，IR-N高于IPTC-N和S-N(P<0.05)；IPTC-N高于S-N(P<0.05)。
　　細(xì)胞內(nèi)pH值熒光強度：（1）IR組低于N組、IPTC組與S組(P<0.05)；N組、IPTC組與S組組間

7、比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；（2）加入CyD后，C+N組、C+IR組高于所對應(yīng)的N組、IR組，且均高于N組(P<0.05)； C+IPTC組、C+S組低于所對應(yīng)的IPTC組、S組，且均低于N組（P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1．硫化氫后處理促進成年大鼠心肌細(xì)胞F-肌動蛋白的重塑，對心肌細(xì)胞骨架的正常結(jié)構(gòu)有一定的保護作用。
　　2．缺氧/復(fù)氧增加成年大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)p38MAPK磷酸化水平，硫化氫后處理可抑制