石家莊雞新城疫病毒的分離及分子生物學(xué)研究.pdf

1、新城疫（英文名為Newcastle Disease，英文縮寫(xiě)為ND），是一種主要發(fā)生在雞、火雞等家禽和野生禽類(lèi)中的由新城疫病毒（英文名為Newcastle Disease Virus，英文縮寫(xiě)為NDV）引發(fā)的敗血性、高度接觸性傳染病，世界各國(guó)都高度重視該病，國(guó)際獸醫(yī)局(OIE)將其歸類(lèi)為動(dòng)物A類(lèi)傳染病。新城疫主要臨床癥狀:染病禽類(lèi)發(fā)病急、腹瀉、呼吸功能障礙、頭冠紫黑等。病理變化主要為全身黏膜、漿膜出血。典型的病變是腺胃黏膜出血。對(duì)家禽而

2、言，新城疫帶來(lái)的不僅為家禽的死亡，還對(duì)家禽、家禽產(chǎn)品經(jīng)濟(jì)貿(mào)易帶來(lái)了非常慘重的損失。所以，全球各地都采取了嚴(yán)格的防控措施來(lái)預(yù)防控制新城疫的流行。
　　從石家莊不同養(yǎng)殖區(qū)的發(fā)病雞群中，分離出一株含有血凝性的病毒，經(jīng)血凝試驗(yàn)、陽(yáng)性血清的血凝抑制試驗(yàn)，確定該分離株為新城疫病毒。對(duì)該毒株進(jìn)行了毒力鑒定及生物學(xué)特性的研究，利用RT-PCR技術(shù)，擴(kuò)增了NDV分離毒株的F基因主要功能區(qū)片段，經(jīng)鑒定、回收純化、克隆至PBS-T載體，通過(guò)PCR、酶切

3、鑒定篩選出陽(yáng)性重組子，進(jìn)行核苷酸序列測(cè)定及遺傳變異分析。序列分析表明所擴(kuò)增目的片段的長(zhǎng)度為1700bP，與預(yù)期擴(kuò)增片段相符。該分離株在F蛋白裂解位點(diǎn)的氨基酸順序?yàn)?12R-R-Q-K-R-F117，與NDV毒株特征相符。將所分離測(cè)定的分離株F基因序列與GeneBank基因序列數(shù)據(jù)庫(kù)中已發(fā)表的薪城疫病毒不同基因型代表株的F基因389bp(1bp～389bp)長(zhǎng)度的核苷酸片段及其相應(yīng)的氨基酸序列(1aa～130aa)進(jìn)行比較，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)

4、化樹(shù)，并確定了分離毒株FR0903株的毒力強(qiáng)弱及其所屬的基因型。經(jīng)過(guò)遺傳進(jìn)化分析顯示，該毒株在此區(qū)段沒(méi)有堿基缺失、插入，但存在多處點(diǎn)突變并呈分散存在。NDV分離株FR0903株F基因核苷酸序列同新城疫經(jīng)典毒株La Sota的同源性是84.1％，同Mukteswar的同源性是86.4％，同國(guó)內(nèi)分離毒株Q-BS的同源性為96.9％。同時(shí)也發(fā)現(xiàn)在分類(lèi)地位方面，該分離株屬于基因Ⅶ型，與我國(guó)同期廣泛流行的基因Ⅶ型新城疫病毒在遺傳進(jìn)化上非常相似，這