新城疫病毒地方分離株生物學(xué)特性的鑒定及疫苗候選株篩選的研究.pdf

1、本研究對(duì)自2000年以來(lái)從不同地區(qū)分離到的新城疫毒株中選取8株有代表性的毒株，經(jīng)雞胚終點(diǎn)稀釋法克隆后，利用RT-PCR技術(shù)，成功地?cái)U(kuò)增出了8株NDV分離株F基因1629bp的核苷酸片段。利用DNAStar 6.0軟件進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)的繪制，確定了基因型，并與參考毒株的核苷酸及相應(yīng)氨基酸序列進(jìn)行了比較。結(jié)果表明，其中6株分離毒株核苷酸同源率在97.4％～99.6％之間，與國(guó)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒株F<,48>E<,9>的核苷酸序列同源率為85.8％

2、～89.3％；推導(dǎo)的氨基酸序列分析顯示，這6株分離毒株氨基酸同源率在96.7％～99.3％之間；并且這6株分離毒株F蛋白的裂解位點(diǎn)氨基酸組成為<'112>R-R-Q-K-R-F<'117>，具有典型的強(qiáng)毒株裂解位點(diǎn)的特點(diǎn)：從進(jìn)化樹(shù)上看這6株分離毒株都屬于Ⅶ型。另外，2株分離毒株核苷酸同源率為99.5％；氨基酸同源率是98.7％；并且這2株分離毒株F蛋白的裂解位點(diǎn)氨基酸組成為<'112>G-R-Q-G-R-L<'117>，具有典型的弱毒株

3、裂解位點(diǎn)的特點(diǎn)，和LaSota的核苷酸同源率較高，分別為98.8％和99.2％；這2株分離毒株都屬于基因Ⅱ型。 在以上生物學(xué)試驗(yàn)分析的基礎(chǔ)上，將8株分離株及LaSota、Ⅰ系、Clone30、F<,48>E<,9>共12株NDV，進(jìn)行交叉血凝抑制試驗(yàn)和交叉病毒中和試驗(yàn)。結(jié)果表明，毒株之間存在一定的抗原性差異。 綜合8株分離株的基因型、生物學(xué)特性和交互免疫性，篩選出2株疫苗候選株，為HB38和F1。致病性試驗(yàn)表明，HB38

4、的MDT為45.6h，ICPI為1.94，IVPI為2.98；F1的MDT為55.2h，ICPI為1.96，IVPI為2.79。這些指標(biāo)都符合強(qiáng)毒株的標(biāo)準(zhǔn)。 對(duì)HB38和F1應(yīng)用RT-PCR技術(shù)成功地克隆了HN基因，利用DNAStar 6.0軟件進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)的繪制，并與參考毒株的核苷酸及相應(yīng)氨基酸序列進(jìn)行了比較。分析表明，HB38和Guangxi/2002同屬于一個(gè)進(jìn)化分支，氨基酸同源率為99.7％；F1和YN-PA01同