紫外線誘變選育富硒酵母及其培養(yǎng)條件的研究.pdf

1、硒是生物體必需的微量元素，具有很多生物學(xué)功能。谷胱甘肽過氧化物酶催化谷胱甘肽參與過氧化反應(yīng)，清除過氧化物的毒害，硒是保持谷胱甘肽過氧化物酶活性的必要成分。但是無(wú)機(jī)硒的吸收率低、毒性大。酵母菌對(duì)微量元素具有很強(qiáng)的吸附作用，可以作為微量元素良好的載體，將無(wú)機(jī)硒轉(zhuǎn)化成有機(jī)硒，提高硒在機(jī)體內(nèi)吸收利用率，降低其毒副作用，且酵母本身含豐富的蛋白質(zhì)和B族維生素，是一種良好的微生物蛋白飼料營(yíng)養(yǎng)源。所以，獲得高產(chǎn)富硒酵母的關(guān)鍵就在于擁有一株好菌株并找到適

2、合的培養(yǎng)條件。本試驗(yàn)就是利用紫外線照射誘變，進(jìn)行抗性篩選高產(chǎn)突變株，并確定制備富硒酵母的最佳條件。 實(shí)驗(yàn)以熱帶假絲酵母(Candida tropicalis)1254為出發(fā)菌，進(jìn)行紫外線照射誘變，酵母經(jīng)紫外線誘變，其致死率曲線表現(xiàn)為“肩形”，即經(jīng)小劑量輻射的酵母細(xì)胞致死率較低，而大劑量的輻射會(huì)使酵母細(xì)胞的致死率明顯升高。隨著輻射時(shí)間的累計(jì)，輻射劑量的增加，突變率逐漸提高，但照射到一定程度時(shí)，突變率會(huì)降低。篩選出20株生長(zhǎng)快、菌落

3、大的突變菌株，接種于含有不同[Se<'4+>]的平板培養(yǎng)基，進(jìn)行梯度抗性篩選，得到耐高濃度硒的能力較強(qiáng)的菌株6株，進(jìn)一步復(fù)篩得到突變株Y-5。結(jié)果顯示：Y-5的生物量和硒含量分別由原來(lái)的0.619 g/100mL、688mg/kg提高到0.779 g/100mL、1252mg/kg。利用單因素試驗(yàn)摸索出了Y-5培養(yǎng)條件：11B<'0>的麥芽汁培養(yǎng)基為最適培養(yǎng)基，發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)間為35h，培養(yǎng)溫度為28℃，培養(yǎng)基含硒量20μg/ml，硒的添加

4、時(shí)間為11h，接種量10％，裝液量為250ml的錐形瓶中裝60ml。然后選出對(duì)硒含量影響較大的3個(gè)因素進(jìn)行正交試驗(yàn)，找到最優(yōu)組合為培養(yǎng)基含硒量20μg/ml，發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)間為35h，接種量10％。在最優(yōu)條件下培養(yǎng)的突變株Y-5，生物量提高了58％，硒含量提高了74.87％，硒含量達(dá)到1343mg/kg。變異菌株Y-5經(jīng)傳5代培養(yǎng)，生產(chǎn)性能穩(wěn)定。 本試驗(yàn)對(duì)富硒酵母中有機(jī)和無(wú)機(jī)硒進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)篩選菌株Y-5有機(jī)硒含量達(dá)93.6％，而出