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1、硒是生物體必需的微量元素,具有很多生物學(xué)功能。谷胱甘肽過氧化物酶催化谷胱甘肽參與過氧化反應(yīng),清除過氧化物的毒害,硒是保持谷胱甘肽過氧化物酶活性的必要成分。但是無機(jī)硒的吸收率低、毒性大。酵母菌對(duì)微量元素具有很強(qiáng)的吸附作用,可以作為微量元素良好的載體,將無機(jī)硒轉(zhuǎn)化成有機(jī)硒,提高硒在機(jī)體內(nèi)吸收利用率,降低其毒副作用,且酵母本身含豐富的蛋白質(zhì)和B族維生素,是一種良好的微生物蛋白飼料營(yíng)養(yǎng)源。所以,獲得高產(chǎn)富硒酵母的關(guān)鍵就在于擁有一株好菌株并找到適
2、合的培養(yǎng)條件。本試驗(yàn)就是利用紫外線照射誘變,進(jìn)行抗性篩選高產(chǎn)突變株,并確定制備富硒酵母的最佳條件。 實(shí)驗(yàn)以熱帶假絲酵母(Candida tropicalis)1254為出發(fā)菌,進(jìn)行紫外線照射誘變,酵母經(jīng)紫外線誘變,其致死率曲線表現(xiàn)為“肩形”,即經(jīng)小劑量輻射的酵母細(xì)胞致死率較低,而大劑量的輻射會(huì)使酵母細(xì)胞的致死率明顯升高。隨著輻射時(shí)間的累計(jì),輻射劑量的增加,突變率逐漸提高,但照射到一定程度時(shí),突變率會(huì)降低。篩選出20株生長(zhǎng)快、菌落
3、大的突變菌株,接種于含有不同[Se<'4+>]的平板培養(yǎng)基,進(jìn)行梯度抗性篩選,得到耐高濃度硒的能力較強(qiáng)的菌株6株,進(jìn)一步復(fù)篩得到突變株Y-5。結(jié)果顯示:Y-5的生物量和硒含量分別由原來的0.619 g/100mL、688mg/kg提高到0.779 g/100mL、1252mg/kg。利用單因素試驗(yàn)摸索出了Y-5培養(yǎng)條件:11B<'0>的麥芽汁培養(yǎng)基為最適培養(yǎng)基,發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)間為35h,培養(yǎng)溫度為28℃,培養(yǎng)基含硒量20μg/ml,硒的添加
4、時(shí)間為11h,接種量10%,裝液量為250ml的錐形瓶中裝60ml。然后選出對(duì)硒含量影響較大的3個(gè)因素進(jìn)行正交試驗(yàn),找到最優(yōu)組合為培養(yǎng)基含硒量20μg/ml,發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)間為35h,接種量10%。在最優(yōu)條件下培養(yǎng)的突變株Y-5,生物量提高了58%,硒含量提高了74.87%,硒含量達(dá)到1343mg/kg。變異菌株Y-5經(jīng)傳5代培養(yǎng),生產(chǎn)性能穩(wěn)定。 本試驗(yàn)對(duì)富硒酵母中有機(jī)和無機(jī)硒進(jìn)行測(cè)定,發(fā)現(xiàn)篩選菌株Y-5有機(jī)硒含量達(dá)93.6%,而出
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