HBV感染不同免疫狀態(tài)與sICAM-1表達(dá)的關(guān)系.pdf

1、目的: 目前對HBV感染與病毒標(biāo)志、免疫指標(biāo)等的研究已有不少報(bào)道,但對 HBV感染不同免疫狀態(tài)與血清 sICAM-1表達(dá)的關(guān)系國內(nèi)外尚未見報(bào)道。目前國內(nèi)外把研究的重點(diǎn)都放在了HBV感染的發(fā)病機(jī)制和相應(yīng)的治療上,雖然取得了一些進(jìn)展,但在有些具體的發(fā)病環(huán)節(jié)上仍不是十分清楚,這也給以后的治療帶來了一定困難,所以結(jié)合目前國內(nèi)外研究趨勢與我們的研究基礎(chǔ),根據(jù)西醫(yī)疾病的分類診斷,通過對廣西地區(qū)HBV感染不同免疫狀態(tài)的調(diào)查,同時(shí)檢測其 sICAM-1

2、的表達(dá),探索 HBV感染不同免疫狀態(tài)與血清sICAM-1表達(dá)的關(guān)系,可以為臨床治療提供理論依據(jù)。
　　方法: 用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測定sICAM-1含量。
　?、侔?用0.05M PH9.9碳酸鹽包被緩沖液,將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。
　　②加樣:加一定稀釋的待檢樣品

3、0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
　?、奂用笜?biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml,37℃孵育0.5~1小時(shí),洗滌。
　?、芗拥孜镆猴@色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。
　?、萁K止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
　　⑥結(jié)果判定:可于白色背景上,直接

4、用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
　　結(jié)果: ①用計(jì)量資料兩個樣本均數(shù)t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)后得知,免疫耐受與健康對照組sICAM-1表達(dá)無顯著差異(P>0.05)。
　?、谟糜?jì)量資料兩個樣本

5、均數(shù)t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)后得知,免疫清除與健康對照組sICAM-1表達(dá)有差異(P<0.05)。
　　③用計(jì)量資料兩個樣本均數(shù)t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)后得知,免疫不全與健康對照組sICAM-1表達(dá)無顯著差異(P>0.05)。
　　④用計(jì)量資料多個樣本均數(shù)F檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)后得知,免疫清除與免疫耐受和免疫不全sICAM-1表達(dá)有差異(P<0.05),而免疫耐受與免疫不全之間sICAM-1表達(dá)則無顯著差異(P>0.05)。
　　結(jié)論: ①免疫清除sICAM