ATRA對(duì)人結(jié)直腸癌LoVo細(xì)胞sICAM-1表達(dá)的影響.pdf

1、結(jié)直腸癌(colorectal cancer,CRC)是消化系統(tǒng)的常見惡性腫瘤之一，根據(jù)世界范圍的流行病調(diào)查發(fā)現(xiàn)，結(jié)直腸癌在北美、西歐和澳大利亞發(fā)病率最高，居內(nèi)臟惡性腫瘤的第一位。在我國的發(fā)病率僅次于胃癌、食管癌而居內(nèi)臟惡性腫瘤的第三位?？勺阍趷盒阅[瘤致死病例中結(jié)直腸癌位居第二。但是，隨著人民生活水平的提高，結(jié)直腸癌的發(fā)病率有逐年上升的趨勢。同1991年相比，2000年城市和農(nóng)村地區(qū)的發(fā)病率分別上升了31.18％和17.51％。

2、 目前，手術(shù)是治療結(jié)直腸癌最有效方法。轉(zhuǎn)移是患者死亡的主要原因。有研究表明惡性腫瘤60％以上會(huì)發(fā)生轉(zhuǎn)移，結(jié)直腸癌外科手術(shù)治療失敗的豐要原因是術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。肝臟具有高糖和豐富的營養(yǎng)環(huán)境，是結(jié)直腸癌最常見的轉(zhuǎn)移部位。而且肝臟常是其惟一轉(zhuǎn)移的臟器，無肝轉(zhuǎn)移的肝外轉(zhuǎn)移則罕見。因此以手術(shù)為主的綜合治療日益受到重視，針對(duì)預(yù)防治療復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移為主的化療，放療地位日益提高。 通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的成熟分化，抑制其增殖，誘導(dǎo)調(diào)亡，抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移而提高療

3、效的治療日益受到人們的重視。 腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移是一個(gè)十分復(fù)雜的生物學(xué)過程，發(fā)生機(jī)理至今仍未完全清楚。對(duì)于腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的步驟，最早是由Liotta提出的三步驟學(xué)說，即黏附、降解和移動(dòng)。是指腫瘤細(xì)胞從原發(fā)部位脫落，通過循環(huán)到達(dá)遠(yuǎn)處，生長發(fā)育成轉(zhuǎn)移瘤。該過程是腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)相瓦作用的結(jié)果。在整個(gè)過程中，細(xì)胞黏附分子發(fā)揮著重要的作用。一方面，腫瘤細(xì)胞必須從原來黏附的原發(fā)灶脫離，這提示黏附在抑制浸潤中發(fā)揮作用；另一方面，腫瘤細(xì)胞又必

4、需黏附到細(xì)胞外基質(zhì)并將其降解才能在其中移動(dòng)，進(jìn)入循環(huán)中，到達(dá)靶器官形成新轉(zhuǎn)移灶。因此針對(duì)黏附分子方面的治療為預(yù)防治療惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移提供了一個(gè)新的方向?？扇苄约?xì)胞間黏附分子1(sICAM-1)參與細(xì)胞間的異質(zhì)黏附和免疫調(diào)節(jié)，為腫瘤的成功轉(zhuǎn)移提供先決條件。幾乎所有的惡性腫瘤都有sICAM-1異常高的表達(dá)，而在周圍正常組織中沒有表達(dá)或僅有極低水平的表達(dá)。 維甲酸足一大類化合物，包括維牛素A及其代謝產(chǎn)物，以及具有類似結(jié)構(gòu)或生物學(xué)

5、活性的人然或人工合成的衍牛物。維牛素A(視黃醇)進(jìn)入人體后轉(zhuǎn)變成視黃醛，再經(jīng)氧化變成維甲酸。維甲酸結(jié)構(gòu)式由環(huán)狀末端、多烯肽側(cè)鏈和極性末端基團(tuán)三部分組成。根據(jù)多烯肽側(cè)鏈的改變，并由于羧基方向不同分為兩種異構(gòu)體，即順式維甲酸及全反式維甲酸(all-trans retinoic acid，ATRA)，其中全反式構(gòu)型最為穩(wěn)定和常見。維甲酸類化合物對(duì)多種惡性腫瘤具有誘導(dǎo)分化，抑制增殖，誘導(dǎo)凋亡等作用。并早已用于急性早幼粒白血病的誘導(dǎo)分化治療。有研

6、究表明ATRA一方面可以調(diào)節(jié)兩種形式的ICAM-1的表達(dá)；另一方面，還可以通過提高NK和LAK(淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞)細(xì)胞的殺傷能力，并使血淋巴細(xì)胞中RARα和RARβ受體表達(dá)上調(diào)，促進(jìn)在免疫過程中起重要作用細(xì)胞因子的表達(dá)。從而在機(jī)體免疫中發(fā)揮了不可忽視的作用，進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移潛能。而sICAM-1亦具有和淋巴細(xì)胞功能相關(guān)性抗原1(LFA-1)結(jié)合的能力，且能夠抑制自然殺傷細(xì)胞及細(xì)胞毒T細(xì)胞的細(xì)胞殺傷作用，降低其抗腫瘤的作用。

7、 目前，尚無關(guān)于全反式維甲酸對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞的可溶性細(xì)胞間黏附分子表達(dá)的影響方面的報(bào)道。 本課題研究的目的是探討全反式維甲酸對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞的可溶性細(xì)胞間黏附分子表達(dá)是否有影響，可以為臨床上應(yīng)用維甲酸治療結(jié)腸癌提供理論依據(jù)，指導(dǎo)其在臨床方面的應(yīng)用。 方法與結(jié)果： 應(yīng)用ELISA法檢測LoVo細(xì)胞表達(dá)sICAM-1的情況 實(shí)驗(yàn)方法：將培養(yǎng)至95％融合的LoVo細(xì)胞消化制成單細(xì)胞懸液，通過細(xì)胞計(jì)數(shù)，調(diào)節(jié)細(xì)胞

8、濃度至1×106/mI，按每孔0.1mL(1×105)接種于A、B、C3個(gè)6孔板上；每板分為5組：空白對(duì)照組(不含全反式維甲酸或無水乙醇)，10廣5 mol/L全反式維甲酸組，10-6 mol/L全反式維甲酸組，10～mol/L全反式維甲酸組，10-2mol/L無水乙醇組。并且每一組作3個(gè)相應(yīng)的復(fù)板。 細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)至指數(shù)生長期時(shí)，空白對(duì)照組加以同等量的RPMI-1640繼續(xù)培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)組(10-5mol/L全反式維甲酸組，10-6

9、mol/L全反式維甲酸組，10-7mol/L全反式維甲酸組，10-2mol/L無水乙醇組)分別換用含相應(yīng)濃度藥物的RPMI-1640的溶液進(jìn)行培養(yǎng)。取不同濃度藥物不同時(shí)間作用的5×106個(gè)細(xì)胞，培養(yǎng)體系為5ml，于370C,5％CO2飽和濕度的培養(yǎng)箱中分別培養(yǎng)24hr，48hr，72hr。然后于離心機(jī)中2000r/min離心10min，收集細(xì)胞培養(yǎng)的上清液。然后進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)，檢查上清液中sICAM-1的含量，行ELISA實(shí)驗(yàn)時(shí)，嚴(yán)

10、格按照試劑盒測試步驟進(jìn)行。每個(gè)細(xì)胞上清液樣本皆行正副2個(gè)測試孔，最后取平均OD值。然后通過酶聯(lián)儀檢測450nm波長的吸光度值(OD值)，結(jié)果輸入SPSS11.0 for Windows軟件，應(yīng)用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)的方差分析(Tow Way ANOVA)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，并繪制不同濃度全反式維甲酸作用于LoVo細(xì)胞24hr，48hr，72hr時(shí)細(xì)胞sICAM-1表達(dá)情況的圖形。 結(jié)果： (1)本組中無水乙醇組對(duì)LoVo細(xì)胞sICA

11、M-1表達(dá)的影響與對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)。結(jié)合本實(shí)驗(yàn)可以認(rèn)為本實(shí)驗(yàn)組所使用的全反式維甲酸溶劑——無水乙醇對(duì)LoVo細(xì)胞sICAM-1的表達(dá)無明顯影響。10-5mol/L全反式維甲酸組，10-6 mol/L全反式維甲酸組，10-7mol/L全反式維甲酸組與空白組sICAM-1表達(dá)的影響差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。10-5mol/L全反式維甲酸組，10-6mol/L全反式維甲酸組，10-7mol/L全反式維甲酸組兩兩比

12、較sICAM-1表達(dá)的影響差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。 (2)各實(shí)驗(yàn)組在不同濃度全反式維甲酸作用24hr，48hr，72hr各時(shí)段兩兩比較對(duì)sICAM-1表達(dá)的影響差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。 (3)不同濃度全反式維甲酸作用于LoVo細(xì)胞不同時(shí)段的sICAM-1表達(dá)抑制圖形顯示，全反式維甲酸對(duì)人結(jié)直腸癌LoVo細(xì)胞sICAM-1表達(dá)的抑制率呈明顯的時(shí)間、濃度依賴性。 結(jié)論： 人結(jié)直腸

13、癌LoVo細(xì)胞株表達(dá)sICAM-1。全反式維甲酸可以抑制人結(jié)直腸癌LoVo細(xì)胞sICAM-1的表達(dá)，并呈一定的時(shí)間和濃度依賴性。 全文結(jié)論： 1.人結(jié)直腸癌LoVo細(xì)胞株表達(dá)sICAM-1。 2.全反式維甲酸可抑制sICAM-1的表達(dá)，并呈一定的時(shí)間和濃度依賴性。sICAM-1表達(dá)的抑制率隨藥物濃度的增大和作用時(shí)間的延長而增高。 3.全反式維甲酸能夠抑制sICAM-1的表達(dá)，提高機(jī)體的免疫力。因而，推斷A