運用清熱解毒法治療慢性炎癥相關(guān)病變的研究.pdf

1、研究目的： 本研究理論部分目的在于探討內(nèi)生熱毒與慢性炎癥的相關(guān)性，提出慢性炎癥相關(guān)病變從熱毒論治的思路；總結(jié)運用清熱解毒法治療慢性炎癥相關(guān)病變的治療規(guī)律，為臨床辨證治療此類疾病提供理論基礎(chǔ)。實驗部分以慢性炎癥相關(guān)病變之一血管生成為靶點，研究清熱解毒代表中藥黃芩主要成分黃芩苷、金銀花主要成分綠原酸對這一事件的影響作用，從而為臨床用藥提供實驗依據(jù)，為清熱解毒法實質(zhì)的闡釋提供科學(xué)的支持。 研究方法： 理論部分以文獻研究

2、為主，全面總結(jié)前人研究成果，深度挖掘中西醫(yī)不同領(lǐng)域理論內(nèi)在聯(lián)系，歸納出病理共性和治療規(guī)律。實驗方案分為體內(nèi)和體外兩部分，體內(nèi)部分以雞胚絨毛尿囊膜（CAM）為模型，觀察藥物黃芩苷、綠原酸對血管新生的影響作用；體外實驗主要通過觀察黃芩苷、綠原酸對血管生成不同環(huán)節(jié)（血管內(nèi)皮基底膜的降解、內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移以及管腔形成過程）的影響作用，來評價藥物是否具有抗血管生成的活性。具體方法為：對血管內(nèi)皮細(xì)胞Ea.hy926進行常規(guī)培養(yǎng)，采用MTT法檢測

3、藥物對細(xì)胞增殖的影響；劃痕實驗、Transwell實驗觀察藥物對內(nèi)皮細(xì)胞遷移的影響；人工基質(zhì)膠法觀察藥物對內(nèi)皮細(xì)胞管腔形成的影響；明膠酶譜法檢測藥物對內(nèi)皮細(xì)胞分泌MMP9、MMP2活性的影響。實驗數(shù)據(jù)采用SPSS統(tǒng)計軟件進行處理。 研究結(jié)果： 本研究理論上對慢性炎癥的內(nèi)涵進行了全面總結(jié)，追蹤國內(nèi)外最新研究情況，重點闡述了慢性炎癥相關(guān)病變尤其是血管生成的相關(guān)背景；從內(nèi)生熱毒與慢性炎癥相關(guān)病變的各自特點，展開對二者相關(guān)性的探

4、討，總結(jié)了內(nèi)在聯(lián)系和規(guī)律；并由此進一步論述了運用清熱解毒法治療慢性炎癥相關(guān)病變的用藥規(guī)律。 實驗部分的總結(jié)如下：1、體內(nèi)實驗即CAM法發(fā)現(xiàn)，無論黃芩苷還是綠原酸，各個濃度對血管生成有一定的抑制作用，且黃芩苷（濃5度0.01、0.1、1mM的抑制率分別為53.33％、66.67％、73.33％）呈現(xiàn)濃度依賴性。2、MTT實驗表明，黃芩苷可以抑制Ea.hy926的增殖，OD值與空白組比較有顯著性差異（p<0.01），各個濃度（1、0

5、.1、0.01mM）下細(xì)胞存活率分別為49.976％、70.78％、71.01％；綠原酸高濃度（1 mM）能夠抑制細(xì)胞增殖，OD值與空白組比較有顯著性差異（P<0.05），但是無濃度依賴性。3、對劃痕實驗中各組細(xì)胞遷移率的統(tǒng)計數(shù)據(jù)來看，以姜黃素作對比，黃芩苷各個濃度（1、0.1、0.01mM）遷移率分別為20.67％、8.67％、97.33％，呈現(xiàn)較為明顯的抑制作用；綠原酸各個濃度（1、0.1、0.01 mM）遷移率分別為60.67％、

6、1.0067％、1.2467％，有一定的濃度依賴性。4、Transwell實驗結(jié)果顯示，黃芩苷組的遷移細(xì)胞分別為29±4、41.8±17.12、36.7342.8±6.98、76.6±7.74，與對照組相比，具有顯著性差異（p<0.01），綠原酸組的遷移細(xì)胞分別為11.8±3.03、26.8±5.68、85.6±13.24、99±7.88，與對照組相比，具有顯著性差異（p<0.01）。5、在內(nèi)皮小管形成實驗中，高濃度黃芩苷、綠原酸（1m