運用清熱解毒法治療慢性炎癥相關病變的研究.pdf

1、研究目的： 本研究理論部分目的在于探討內生熱毒與慢性炎癥的相關性，提出慢性炎癥相關病變從熱毒論治的思路；總結運用清熱解毒法治療慢性炎癥相關病變的治療規(guī)律，為臨床辨證治療此類疾病提供理論基礎。實驗部分以慢性炎癥相關病變之一血管生成為靶點，研究清熱解毒代表中藥黃芩主要成分黃芩苷、金銀花主要成分綠原酸對這一事件的影響作用，從而為臨床用藥提供實驗依據，為清熱解毒法實質的闡釋提供科學的支持。 研究方法： 理論部分以文獻研究

2、為主，全面總結前人研究成果，深度挖掘中西醫(yī)不同領域理論內在聯系，歸納出病理共性和治療規(guī)律。實驗方案分為體內和體外兩部分，體內部分以雞胚絨毛尿囊膜（CAM）為模型，觀察藥物黃芩苷、綠原酸對血管新生的影響作用；體外實驗主要通過觀察黃芩苷、綠原酸對血管生成不同環(huán)節(jié)（血管內皮基底膜的降解、內皮細胞的增殖、遷移以及管腔形成過程）的影響作用，來評價藥物是否具有抗血管生成的活性。具體方法為：對血管內皮細胞Ea.hy926進行常規(guī)培養(yǎng)，采用MTT法檢測

3、藥物對細胞增殖的影響；劃痕實驗、Transwell實驗觀察藥物對內皮細胞遷移的影響；人工基質膠法觀察藥物對內皮細胞管腔形成的影響；明膠酶譜法檢測藥物對內皮細胞分泌MMP9、MMP2活性的影響。實驗數據采用SPSS統(tǒng)計軟件進行處理。 研究結果： 本研究理論上對慢性炎癥的內涵進行了全面總結，追蹤國內外最新研究情況，重點闡述了慢性炎癥相關病變尤其是血管生成的相關背景；從內生熱毒與慢性炎癥相關病變的各自特點，展開對二者相關性的探

4、討，總結了內在聯系和規(guī)律；并由此進一步論述了運用清熱解毒法治療慢性炎癥相關病變的用藥規(guī)律。 實驗部分的總結如下：1、體內實驗即CAM法發(fā)現，無論黃芩苷還是綠原酸，各個濃度對血管生成有一定的抑制作用，且黃芩苷（濃5度0.01、0.1、1mM的抑制率分別為53.33％、66.67％、73.33％）呈現濃度依賴性。2、MTT實驗表明，黃芩苷可以抑制Ea.hy926的增殖，OD值與空白組比較有顯著性差異（p<0.01），各個濃度（1、0

5、.1、0.01mM）下細胞存活率分別為49.976％、70.78％、71.01％；綠原酸高濃度（1 mM）能夠抑制細胞增殖，OD值與空白組比較有顯著性差異（P<0.05），但是無濃度依賴性。3、對劃痕實驗中各組細胞遷移率的統(tǒng)計數據來看，以姜黃素作對比，黃芩苷各個濃度（1、0.1、0.01mM）遷移率分別為20.67％、8.67％、97.33％，呈現較為明顯的抑制作用；綠原酸各個濃度（1、0.1、0.01 mM）遷移率分別為60.67％、

6、1.0067％、1.2467％，有一定的濃度依賴性。4、Transwell實驗結果顯示，黃芩苷組的遷移細胞分別為29±4、41.8±17.12、36.7342.8±6.98、76.6±7.74，與對照組相比，具有顯著性差異（p<0.01），綠原酸組的遷移細胞分別為11.8±3.03、26.8±5.68、85.6±13.24、99±7.88，與對照組相比，具有顯著性差異（p<0.01）。5、在內皮小管形成實驗中，高濃度黃芩苷、綠原酸（1m