清熱解毒活血法治療狼瘡性腎炎療效及作用機(jī)理探討.pdf

1、目的:(1)總結(jié)中西醫(yī)對(duì)狼瘡性腎炎(LN)的發(fā)病機(jī)制和防治措施的研究進(jìn)展；(2)觀察清熱解毒活血中藥對(duì)瘀熱痹阻證LN的臨床療效。(3)觀察Ⅳ型LN患者血清對(duì)正常人腎小球系膜細(xì)胞(GMC)增殖的影響以及清熱解毒活血中藥對(duì)Ⅳ型LN血清干預(yù)下GMC增殖、細(xì)胞凋亡、GMC中Bcl-2 蛋白合成和Bcl-2mRNA 表達(dá)的影響，從細(xì)胞分子生物學(xué)水平探討清熱解毒活血中藥治療LN的機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法:(1)文獻(xiàn)研究：通過(guò)查閱

2、大量古代和現(xiàn)代中、西醫(yī)國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)，總結(jié)和評(píng)價(jià)有關(guān)LN的中醫(yī)認(rèn)識(shí)、病因病機(jī)、西醫(yī)發(fā)病機(jī)制以及中西醫(yī)防治措施方面的研究現(xiàn)狀。(2)臨床研究：用簡(jiǎn)單隨機(jī)化、前瞻性的研究方法，將60例瘀熱痹阻證LN患者按1:1比例分為對(duì)照組和治療組。對(duì)照組采用常規(guī)西醫(yī)治療，治療組在對(duì)照組的基礎(chǔ)上加用清熱解毒活血中藥治療，3月為一療程。觀察患者主要癥狀、證候 (面部紅斑、發(fā)熱、口瘡、雙手紅斑、關(guān)節(jié)疼痛、關(guān)節(jié)腫脹、肌肉疼痛、脫發(fā)、浮腫、胸痛、心悸、乏力、煩躁、手足

3、心熱、口干、失眠、耳鳴、痤瘡、咽痛、月經(jīng)血塊)和實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)(白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、血紅蛋白、血小板、尿白細(xì)胞、尿紅細(xì)胞、尿蛋白、尿素氮、肌酐、血漿白蛋白、血沉、C<,3>、C<,4>、CH<,50>、抗核抗體、抗雙鏈DNA抗體 (抗ds-DNA 抗體)、凝血功能等)的改善情況，計(jì)算治療前后的狼瘡活動(dòng)評(píng)分(SLEDAI)和中醫(yī)證候積分，評(píng)定疾病療效和證候療效。(3)實(shí)驗(yàn)研究：①將正常對(duì)照血清和不同濃度(5％、10％、15％、20％)的Ⅳ型

4、LN患者的血清作用于GMC，觀察其對(duì)GMC增殖的影響，并選擇對(duì)GMC 增殖影響最顯著的一組血清(x％)用于下一步的實(shí)驗(yàn)。②結(jié)合血清藥理學(xué)方法，分為5組進(jìn)行觀察 (Ⅰ組為空白對(duì)照組、Ⅱ組為對(duì)照組血清+x％LN 血清組、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組分別為低、中、高濃度含藥血清+x％LN 血清組)，分別采用MTT法檢測(cè)GMC的增殖及抑制率，熒光法和流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)GMC細(xì)胞凋亡。③再將實(shí)驗(yàn)分為5組進(jìn)行，1組為空白對(duì)照組、2組為對(duì)照組血清+x％LN 血清組、

5、3、4、5組分別為低、中、高濃度含藥血清+x％LN 血清組，采用western blot檢測(cè)GMC中抑凋亡基因Bcl-2 蛋白的合成、采用逆轉(zhuǎn)錄-多聚酶鏈反應(yīng) (RT-PCR)測(cè)定Bcl-2mRNA 的表達(dá)。 結(jié)果:(1)文獻(xiàn)研究：①病名：根據(jù)狼瘡性腎炎的臨床表現(xiàn)可歸屬于中醫(yī)“陰陽(yáng)毒”、“紅蝴蝶瘡”、“陽(yáng)毒發(fā)斑”、“痹證”、“水腫”、“虛勞(腎勞)”等范疇。②病因病機(jī)：肝腎陰虛、熱毒血瘀為瘀熱痹阻證LN的病機(jī)特點(diǎn)。③治療：主要分

6、為分型論治、分期論治、中成藥治療、自擬方治療、單味藥或中藥提取物治療、中藥注射液治療及其它療法，取得較好的療效，目前多數(shù)學(xué)者采用清熱解毒活血法為主治療LN。④現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究：LN 發(fā)病復(fù)雜，與遺傳因素(遺傳易感因素等)、GMC增殖及凋亡異常、免疫調(diào)節(jié)功能異常(細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)失衡、自身抗體如抗 ds-DNA抗體、抗心磷脂抗體等的產(chǎn)生和免疫復(fù)合物清除能力下降等)以及神經(jīng)、內(nèi)分泌、代謝因素等有關(guān)，其中，腎小球固有細(xì)胞如 GMC 增殖、凋亡異常是

7、LN 發(fā)生、發(fā)展的重要機(jī)制，因此，防治措施力圖抑制腎小球固有細(xì)胞如GMC的增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。治療上有糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑、其它療法 (血漿置換、免疫吸咐療法、免疫球蛋白)等，但西醫(yī)治療存在著治療方案不規(guī)范、部分患者對(duì)治療不敏感或產(chǎn)生耐藥、副作用大等缺點(diǎn)，因此，研究療效確切、經(jīng)濟(jì)、副作用較小的中醫(yī)藥治療方案成為當(dāng)前臨床研究的重點(diǎn)。(2)臨床研究：治療組疾病療效評(píng)定總有效率和證候療效評(píng)定總有效率分別為83.33％、93.33％，疾病療效

8、高于對(duì)照組，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P>0.05)，證候療效明顯高于對(duì)照組，差異有非常顯著性意義 (P<0.01)。治療組治療后 SLEDAI 和中醫(yī)證候積分較治療前均明顯減少，差異有非常顯著性意義(P均<0.01)；治療組治療后SLEDAI 的降低優(yōu)于對(duì)照組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P>0.05)，中醫(yī)證候積分較對(duì)照組明顯降低，差異有非常顯著性意義(P<0.01)。二組患者的LN 主癥較治療前均可明顯減輕，差異有非常顯著性意義 (P均<0.01

9、)，且治療組治療后LN主癥的改善作用優(yōu)于對(duì)照組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P>0.05)，與對(duì)照組相比患者的煩躁、咽痛、痤瘡、月經(jīng)血塊、口干、手足心熱、耳鳴、心悸癥狀也明顯減輕，差異有非常顯著性意義 (P均<0.01)。在實(shí)驗(yàn)室檢查方面，治療組患者治療后白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、血紅蛋白、血小板、血漿白蛋白、C<,3>、C<,4>、CH<,50>明顯升高，尿紅細(xì)胞、尿蛋白、ANA滴度、血沉、血漿纖維蛋白原明顯降低，抗 ds-DNA 抗體轉(zhuǎn)陰的作用也

10、較明顯，與治療前相比，差異均有非常顯著性意義(P均<0.01)；其中，在降低血沉、抗ds-DNA抗體轉(zhuǎn)陰方面的作用優(yōu)于對(duì)照組，差異有顯著性意義 (P<0.05)。(3)實(shí)驗(yàn)研究：①Ⅳ型LN 患者血清對(duì) GMC 增殖的影響：發(fā)現(xiàn)不同濃度(5％、10％、15％、20％)的Ⅳ型LN血清均可明顯促進(jìn)GMC增殖，與對(duì)照血清相比有非常顯著性差異(P<0.01)，其中以15％Ⅳ型LN患者血清最為顯著。②觀察清熱解毒活血中藥對(duì)GMC增殖和凋亡的影響：在

11、15％IV型LN患者血清干預(yù)下，不同濃度(低、中、高濃度)的含藥血清均可明顯抑制GMC的增殖、誘導(dǎo)GMC的細(xì)胞凋亡，與對(duì)照組血清相比差異有非常顯著性意義(P<0.01)，其作用呈較明顯的量效關(guān)系，其中，以高濃度含藥血清組的上述作用最為顯著，與其余各組比較差異均有非常顯著性意義(P均<0.01)。③GMC中B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白合成、Bcl-2mRNA表達(dá)的檢測(cè)：對(duì)照血清組的Bcl-2蛋白合成、Bcl-2mRNA 的表

12、達(dá)比空白對(duì)照組顯著增強(qiáng)；而在15％Ⅳ型LN患者的血清干預(yù)下，不同濃度(低、中、高濃度)的清熱解毒活血中藥的含藥血清與對(duì)照組血清相比均可明顯抑制GMC中抑凋亡基因Bcl-2蛋白合成和Bcl-2mRNA 的表達(dá)，其作用呈較明顯的量效關(guān)系，其中，以高濃度含藥血清組的上述作用最為顯著。 結(jié)論:(1)LN的發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，GMC增殖、細(xì)胞凋亡異常是LN發(fā)病的重要機(jī)制；西醫(yī)治療存在部分患者不敏感、副作用大等缺點(diǎn)，研究能抑制GMC增殖、誘導(dǎo)

13、GMC細(xì)胞凋亡的中藥具有廣闊的研究的臨床應(yīng)用前景。(2)臨床研究顯示：清熱解毒活血中藥不僅可以顯著改善瘀熱痹阻證LN的主癥，改善各項(xiàng)標(biāo)示狼瘡活動(dòng)的實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)，而且可以明顯減少SLEDA工和中醫(yī)證候積分，對(duì)瘀熱痹阻證LN有較好的治療作用，副作用小。(3)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)：Ⅳ型LN患者血清可明顯促進(jìn)GMC的增殖，以15％Ⅳ型LN患者血清最為明顯。而清熱解毒活血中藥的含藥血清可明顯抑制15％Ⅳ型LN患者血清干預(yù)下的GMC 增殖、誘導(dǎo)GMC 的