甘藍(lán)型油菜DH195-14同型核不育系及臨保系的標(biāo)記輔助選育.pdf

1、雜種優(yōu)勢利用能夠顯著提高作物產(chǎn)量并有效地改善作物品質(zhì)。隱性細(xì)胞核雄性不育作為雜種優(yōu)勢利用的一條重要途徑，具有不育性穩(wěn)定、敗育徹底，恢復(fù)源廣等優(yōu)點。隱性細(xì)胞核雄性不育系9012AB可獲得100%不育群體，在生產(chǎn)中已實現(xiàn)“三系”配套，解決了傳統(tǒng)“二系”制種時拔除50%可育株的麻煩，在顯著提高制種效率的同時也保證了雜種純度，具有很好的應(yīng)用前景。選育遺傳背景一致的臨保系和純合兩型系是“三系”制種的關(guān)鍵。然而，由于育性受兩對基因控制，依靠傳統(tǒng)的育

2、種方法選育難度大、效率低。分子標(biāo)記輔助選擇以其對目標(biāo)基因準(zhǔn)確快速的選擇和遺傳背景的快速回復(fù)，為回交育種提供了有效工具。
　　 溫度敏感型波里馬細(xì)胞質(zhì)雄性不育系DH195-14A具有雙低、高抗倒伏、配合力強(qiáng)等優(yōu)點，但由于育性不穩(wěn)定，給制種帶來一定的風(fēng)險。董麗2008年開始以9012A(基因型為ms3ms3RfbRfb)為供體親本，DH195-14(基因型為Ms3Ms3RfcRfc)為受體親本，通過分子標(biāo)記輔助選擇結(jié)合回交育種的方法

3、，在F2BC2F2代初步獲得了與輪回親本遺傳背景較近的隱性核不育純合兩型系和臨保系。為了盡可能剔除供體親本的遺傳背景，本研究從F2BC3代選擇雙雜合單株繼續(xù)回交，F(xiàn)2BC4F2代擴(kuò)大群體，并通過目標(biāo)基因兩側(cè)的標(biāo)記分析，選育出導(dǎo)入片段大小不同的純合兩型系和臨保系。其主要結(jié)果概括如下：
　　 1.對F2BC3代群體的100個單株，采用與Ms3連鎖的SSR標(biāo)記BSR67和BSR72及Rf位點共顯性標(biāo)記BrT22進(jìn)行前景選擇，獲得27株

4、基因型為Ms3ms3RfbRf的單株?；ㄆ诜謩e將部分中選單株繼續(xù)與DH195-14A回交，得到F2BC4代。
　　 2.對F2BC4代群體的94個單株，同樣采用與Ms3連鎖的SSR標(biāo)記BSR67和BSR72及Rf位點共顯性標(biāo)記BrT22進(jìn)行前景選擇，獲得18株基因型為Ms3ms3RfbRf的單株。于花期分別套袋自交，最終收獲7株F2BC4F2代種子用于大群體分析。
　　 3.穴盤播種F2BC4F2代種子，于出苗初期對F2

5、BC4F2代群體的9024個單株，采用Ms3位點共顯性的SSR標(biāo)記BSR72，Rf位點共顯性標(biāo)記BrT22進(jìn)行前景選擇。從中挑選出基因型為Ms3ms3RfbRfb的可育株、基因型為ms3ms3RfbRfb的不育株和基因型為ms3ms3RfcRfc的臨保株，并逐一進(jìn)行重復(fù)鑒定，隨后將中選單株移栽至大田。
　　 4.為了確認(rèn)所獲得的純合兩型系F株與臨保單株的真實性，采用基因內(nèi)的顯性標(biāo)記M-IP11(與Ms3連鎖)和基因附近的顯性標(biāo)記

6、M-IP21(與ms3連鎖)驗證Ms3位點。采用基因內(nèi)的共顯性標(biāo)記標(biāo)記G2I-14驗證Rf位點，最終獲得TAM系單株524株，純合兩型系F單株1075株。用與Ms3連鎖且物理距離不同的標(biāo)記篩選TAM系單株中基因兩側(cè)發(fā)生重組的單株，最終僅獲得1株編號為MG34的單重組單株，重組發(fā)生在Ms3位點M-IP2標(biāo)記一側(cè)，離目標(biāo)基因物理距離在400-800kb之間。用與Rf連鎖且物理距離不同的標(biāo)記對純合兩型系F單株的Rf位點進(jìn)行重組單株篩選，最終獲