油菜隱性核不育基因特異標(biāo)記開發(fā)及高油酸低亞麻酸核不育系的標(biāo)記輔助選擇.pdf

1、油菜是世界范圍內(nèi)重要的油料作物之一，菜籽油是我國自產(chǎn)食用植物油的第一大來源。利用雜種優(yōu)勢可以有效地提高油菜的產(chǎn)量，而雄性不育是油菜雜交種生產(chǎn)的最主要途徑。細(xì)胞核雄性不育由于其不育性穩(wěn)定、徹底，不受胞質(zhì)負(fù)效應(yīng)影響等特點(diǎn)，在油菜雜種優(yōu)勢利用中占有越來越大的比例。目前，針對油菜細(xì)胞核雄性不育基因開發(fā)的標(biāo)記，大多是與目標(biāo)基因緊密連鎖的標(biāo)記，而基于目標(biāo)基因自身DNA序列多態(tài)性開發(fā)的功能標(biāo)記很少。本研究旨在前人研究的基礎(chǔ)上，開發(fā)甘藍(lán)型油菜隱性核不育

2、基因BnMs1和BnMs2的特異分子標(biāo)記，并將它們與高油酸、低亞麻酸分子標(biāo)記結(jié)合使用，開展高油酸、低亞麻酸性狀轉(zhuǎn)育隱性核不育系的分子標(biāo)記輔助選擇研究，以實(shí)現(xiàn)雜種優(yōu)勢利用與品質(zhì)育種相結(jié)合，為高油酸、低亞麻酸雜交新品種選育創(chuàng)造優(yōu)良材料。主要研究結(jié)果如下:
　　 1、基于BnMs1的SNP位點(diǎn)和BnMs2序列長度差異，分別設(shè)計(jì)了2位點(diǎn)特異引物和4條等位基因特異引物，結(jié)合PCR擴(kuò)增效果的優(yōu)化，獲得了在不育和可育材料中有多態(tài)性的基因特異標(biāo)

3、記ZLMS1和ZLMS2。
　　 2、根據(jù)SNP位點(diǎn)等位基因特異引物PCR效果，發(fā)現(xiàn)僅包含一個(gè)單堿基差異的引物無法顯示SNP差異，而通過在引物3'-端第3位引入A/T錯(cuò)配可得到理想的多態(tài)性擴(kuò)增，但同一位置的C/T錯(cuò)配擴(kuò)增效果沒有A/T錯(cuò)配的特異性強(qiáng)。這些結(jié)果對利用錯(cuò)配技術(shù)提高SNP標(biāo)記應(yīng)用范圍具有參考意義。
　　 3、利用上述不育基因特異分子標(biāo)記，對高油酸低亞麻酸轉(zhuǎn)育核不育系的各世代單株進(jìn)行基因分型。在供檢測的每個(gè)世代群

4、體中，育性基因型的分離結(jié)果均與理論一致。同時(shí)，從3078個(gè)單株的BC2F1群體篩選出的10株（x2=0.089）攜帶有高油酸低亞麻酸位點(diǎn)的不育株，在花期進(jìn)行育性調(diào)查，發(fā)現(xiàn)基因型和表現(xiàn)型均一致。
　　 4、利用油酸和亞麻酸等位基因特異分子標(biāo)記，對F2代自交種子進(jìn)行油酸和亞麻酸含量的分析，結(jié)果表明:在含有高油酸和低亞麻酸位點(diǎn)的單株中，種子油酸含量達(dá)到73％以上，亞麻酸含量低于5％，表明標(biāo)記輔助選擇能在早期有效鑒定出所需基因型。