分子標(biāo)記輔助選擇轉(zhuǎn)育油菜高油酸隱性核不育系.pdf

1、油菜是全球第三大植物油來(lái)源，也是我國(guó)國(guó)產(chǎn)植物油的重要來(lái)源。改良菜籽油中脂肪酸成分能提高菜籽油的食用價(jià)值和用作新型能源以及工業(yè)原料的競(jìng)爭(zhēng)力，其中提高菜籽油中的油酸含量是油菜脂肪酸改良的重要目標(biāo)之一。本課題旨在利用分子標(biāo)記輔助選擇回交轉(zhuǎn)育甘藍(lán)型油菜高油酸隱性核不育系，為高油酸雜交種生產(chǎn)提供育種資源，并開(kāi)發(fā)有效的分子標(biāo)記輔助選擇方法。主要結(jié)果如下:
　　1.通過(guò)回交轉(zhuǎn)育結(jié)合分子標(biāo)記輔助選擇篩選出了三個(gè)回交組合(甲ZL593A×甲9800

2、、甲ZL353A×11品6、甲ZL100A×甲9818) BC2F2群體中的高油酸不育株(ms1ms1ms2ms2)、高油酸保持株（Ms1ms1ms2ms2）、高油酸恢復(fù)株（Ms1 Ms1ms2ms2）以及BC3F1群體中基因型為AaMs1ms1的雜合型單株。同時(shí)也篩選出兩個(gè)回交組合（甲ZL360A×11品9、甲ZL353A×甲9829）BC1F1群體中基因型為AaMs1ms1的雜合型單株。
　　2.在前人研究的基礎(chǔ)上重新設(shè)計(jì)了不

3、育等位基因ms1的特異性引物，與Ms1的引物進(jìn)行雙重PCR檢測(cè)，經(jīng)過(guò)測(cè)試引物組合Ms1-2F-1，Ms1-2R-6與Ms1的引物進(jìn)行雙重PCR擴(kuò)增的效果最好，能夠一次性區(qū)分隱性純合、顯性純合、雜合型三種基因型。利用該引物組合在BC2F2群體中進(jìn)行了育性基因型的鑒定，在花期進(jìn)行的育性調(diào)查結(jié)果與鑒定出的育性基因型完全匹配，驗(yàn)證了用該引物進(jìn)行前景選擇的準(zhǔn)確性。
　　3.通過(guò)對(duì)五個(gè)回交群體（甲ZL593A×甲9800、甲ZL353A×11

4、品6、甲ZL100A×甲9818、甲ZL360A×11品9、甲ZL353A×甲9829）和五個(gè)輪回親本（甲9800、11品6、甲9818、11品9、甲9829）進(jìn)行Ms2和ms2的標(biāo)記檢測(cè)，并結(jié)合育性調(diào)查確定了五個(gè)輪回親本均含有不育基因ms2，而且為純合狀態(tài)。對(duì)96份正?？捎筒瞬牧线M(jìn)行Ms2和Ms1的標(biāo)記檢測(cè)，經(jīng)檢測(cè)有35份材料含有不育基因ms2，其中有21份材料在該位點(diǎn)為純合狀態(tài)，有14份材料在該位點(diǎn)為雜合狀態(tài);92份材料具有正常的

5、可育基因型Ms1Ms1，4份材料具有雜合的可育基因型Ms1ms1。結(jié)果表明在正?？捎筒酥杏邢喈?dāng)比例的材料也含有不育基因ms2，在Ms1位點(diǎn)大部分材為正常的可育基因型。
　　4.對(duì)三個(gè)回交組合（甲ZL593A×甲9800、甲ZL353A×11品6、甲ZL100A×甲9818）BC1F1群體的前景入選單株進(jìn)行了AFLP標(biāo)記背景選擇。經(jīng)過(guò)背景篩選，從每個(gè)回交組合中篩選出了背景回復(fù)率較高的6株單株，背景回復(fù)率最高的單株背景恢復(fù)到輪回親本

6、的90.3％。
　　5.利用目標(biāo)基因BnFAD2和Ms1的側(cè)翼標(biāo)記對(duì)三個(gè)回交組合(甲ZL593A×甲9800、甲ZL353A×11品6、甲ZL100A×甲9818) BC3F1和BC2F2群體中的前景入選單株進(jìn)行重組交換單株的篩選。經(jīng)過(guò)篩選在回交組合甲ZL593A×甲9800中得到5株在BnFAD2附近發(fā)生單交換的單株，1株在BnFAD2附近發(fā)生雙交換的單株，4株在Ms1附近發(fā)生單交換的單株，其中單株DL056-1和DL061-6