鵝漿膜炎病原調查及其免疫、微量凝集試驗方法的研究.pdf

1、鵝漿膜炎是指由鴨疫里默氏桿菌(Riemerella anatipestifer，RA)引起的以纖維蛋白滲出并在臟器表面沉積，胸、腹腔大量積液為特征的疫病，2-8周齡鵝多發(fā)，發(fā)病率90％，死亡率lO％-40％，給養(yǎng)鵝業(yè)造成很大經濟損失。Riemer于1904年首次報道鵝滲出性敗血病，病原命名為敗血性巴氏桿菌(Pasteurella septicaemia)。后來認識到該菌與鴨漿膜炎的病原同類，為紀念Riemer氏的發(fā)現(xiàn)命名為鴨疫里默氏桿菌

2、(Riemerella anatipestifer，RA)。RA分為21個血清型，型之間無交叉免疫保護。RA對慶大、卡那、沙星類抗生素等敏感。鵝、鴨養(yǎng)殖中廣泛使用抗生素防治本病，但耐藥性和藥殘問題突出。近年，重慶市大力發(fā)展種草養(yǎng)鵝事業(yè)，榮昌、永川等地鵝漿膜炎流行嚴重，急需綜合防制技術。為此，我們進行了研究，取得如下成果。 1、確診了我市流行的鵝漿膜炎。該病發(fā)生于10-50日齡小鵝，縮頸，腳軟，不愿走動，呼吸有雜音，拉稀，糞便為黃

3、白色。典型病變有纖維素性心包炎、肝周炎和氣囊炎。發(fā)病率40％左右，用抗菌素防治后，死亡率控制在18％以內。采取巧克力平板從6次發(fā)病中均分離到細菌，其中編號為XJY1、YC3和XJY2的3株細菌系統(tǒng)鑒定為RA，對慶大霉素和新霉素高度敏感，2株對頭孢三嗪、頭孢唑啉、卡那霉素高度敏感。12日齡榮昌白鵝本動物回歸試驗，攻毒劑量為5×10<'9>CPU/只，觀察7天，XJY1和XJY2發(fā)病率為80％(4/5)和100％(5/5)，死亡率為60％(

4、1/5)和80％(4/5)。 2、同圈感染試驗證明，鴨漿膜炎可以傳染給鵝。10日齡健康鴨皮下接種鴨RA強毒AF株菌液(8×10<'9>CPU/ml)0.4ml后，與10日齡健康小鵝同圈飼養(yǎng)7天。結果是，攻毒鴨死亡率為55％(4/8)，存活鴨全部(4/4)撲殺后均有鴨漿膜炎典型病變。同圈飼養(yǎng)的8只小鵝于鴨攻毒后的次日發(fā)病，第3天出現(xiàn)死亡，死亡率為75％(6/8)，存活的2只鵝撲殺后有心包炎和肝周炎。AF株菌液直接注射組小鵝，注射當

5、天即發(fā)生死亡，死亡率高達100％。注射生理鹽水對照組鴨鵝各6只均健康成活。撲殺后未見到臟器異常。 3、鵝RA對小鴨有致病力。XJY1株和XJY2株菌液(8×10<'9>CPU/mL)0.7mL頸部皮下接種12日齡花邊鴨，觀察8天。XJY1組先表現(xiàn)不食，48小時后恢復吃飼，但較健康對照組減飼30％以上。5只實驗鴨中出現(xiàn)臨床癥狀的2只(占40％)，死亡0，撲殺后觀察，4只有心包炎和肝周炎病變，發(fā)病率應為80％。XJY2組出現(xiàn)臨床癥狀

6、者60％(3/5)，死亡40％(2/5)，活下來的3只鴨撲殺后2只有心包炎和肝周炎病變，發(fā)病率也應為80％((4/5)。 4．建立的微量凝集試驗(Microagglutination test，MAT)方法檢測鵝血清eeRA抗體特異、快速、敏感、成本低。MAT抗原為滅活的RA菌體抗原，濃度以A600為0.7為優(yōu)。V型微孔板中，反應體積為100μL，5μL血清用95μL PS稀釋后進行倍比稀釋，加入50μL抗原，37℃/反應2小時后4℃過

7、夜。陰性孔中央有白色沉淀點，當板垂直樹立時，沉淀點向下滑成線狀；陽性孔中無沉淀點，板垂直樹立時無下滑線現(xiàn)象。應用MAT鑒定，XJYl株與XJY2株為同一血清型，YC3株為另一個血清型。試驗中體會到，MAT結果易于觀察與判定，因而重復性好。一塊板上可以檢測10份血清，便于大量樣品篩查，凈化疫病用。 5．XJYl油乳劑抗原免疫鵝MAT抗體效價隨接種日齡增加而增加，但6日齡組未出現(xiàn)陽性結果。XJY1株(8×10<'9>CPU/ml)免

8、疫30E齡榮昌白鵝后，RA抗體于免疫后7天出現(xiàn)陽性，10天全部陽轉，14天效價達到高峰(7log2以上)，以后下降到次高效價(6log2)，維持至35天后下降，42天時全部轉陰。6、16、22、30和50日齡榮昌白鵝用該抗原免疫14天后的平均抗體效價分別為0(即無陽性)、4.33log2、7．3log2、9．7log2和7.3log2。 6．MAT抗體效價與免疫保護相關，但不是直線相關。鴨RA AF株油乳劑抗原免疫30日齡榮昌白

9、鵝，14天后獲得MAT效價為1：80和1：160的2份鵝血清進行攻毒后的被動免疫保護試驗，即14日齡花邊鴨皮下攻毒AF菌液(8×10<,9>CPU/ml)lmL，30分鐘后注射鵝血清，觀察7無結果是：健康對照組生長發(fā)育完全正常，100％(8/8)健活，攻毒對照組發(fā)病率和死亡率均為100％(8/8)，效價為1：80鵝血清注射0.25、0.5和1ml組存活率分別為0(0/8)、12.5％(1/8)和62.5％(5/8)；效價為1：160鵝血